細(xì)胞增殖過(guò)程中必伴有DNA復(fù)制，3 H標(biāo)記的胸腺嘧啶脫氧核苷(TdR)摻人到新合成的DNA中，隨細(xì)胞增殖，帶有標(biāo)記的DNA均勻分布到子代細(xì)胞中。此時(shí)，測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞中3 H的放射性強(qiáng)度，即可反映細(xì)胞的代謝和增殖情況。

(一)材料

1．待測(cè)(受試后)細(xì)胞懸液，濃度調(diào)至5×105／ml。

2．10％～15％FBS RPMI 1640培養(yǎng)液。

3．3 H—TdR溶液．用細(xì)胞培養(yǎng)液配制，濃度為1μCi3H-TdR／μl。

4．閃爍液。

5．24孔(或96孔)培養(yǎng)板。

6．閃爍計(jì)數(shù)器。

(二)方法

1．在培養(yǎng)板各孔中加入O．1ml或O．2ml細(xì)胞懸液，37℃CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～2．5d。

2．每孔加入含有1μCi3H-TdR新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)4～18h。棄去培養(yǎng)液，PBS洗滌2～3次，清除未摻人同位素。

3．將細(xì)胞消化后，用細(xì)胞樣品收集器將各孔中細(xì)胞分別收集于玻璃纖維濾紙上，56℃烘烤2h，使其干燥。

4．將收集各孔細(xì)胞濾紙分別放人一個(gè)閃爍測(cè)定瓶中，加入3～5ml閃爍液，用閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定每分鐘脈沖數(shù)(counts per minute，CPM)，記錄每孔(約5×104個(gè))細(xì)胞的CPM值。

(三)結(jié)果分析

    被標(biāo)記的細(xì)胞是處于分裂期s期的細(xì)胞。[3 H]一TdR摻人量反映DNA合成的快慢。

(四)注意事項(xiàng)

3 H同位素具有放射損傷作用，實(shí)驗(yàn)應(yīng)在的放射性實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，按照相關(guān)的放射性實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行。