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至今為止,抗原修復有許多種方法,在這些方法中,有的是根據抗體的要求來進行,有的是根據抗原的表達程度來進行,我們則對每種病例每項檢測,都要求必須進行抗原修復,以達到抗原全面表達的狀態。
物理化學試劑抗原修復法。
1. 真空負壓抗原修復法:
① 切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇真空負壓處理5分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0),真空負壓干燥箱預先調至95℃,真空負壓處理10分鐘。
⑤待修復注降至室溫的一,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組化染色方法進行染色。
2.微波輻射抗原修復法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④ 0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0),于微波爐內微波輻射10分鐘,如檢測Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。
⑤待修復液降至室溫后,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學的染色方法進行染色。
3.高壓抗原修復法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④切片放入抗原修復液中,邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續1-4分鐘。
⑤待修復液恢復至室溫后,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學染色方法進行染色。
4.隔水熱抗原修復法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④切片放入0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH0.6)中,邊同容器一起放入水溶鍋中加熱,其間應不斷用溫度計測其溫度,待抗原修復液的溫度達到有效溫度后(92℃↑)。即開始計時,持續40分鐘。
⑤待抗原修復液恢復至室溫后,PBS洗3次,隨后按選定好的免疫組化染色方法進行染色。
5.電爐加熱抗原修復法:
①切片脫蠟至水。
②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④ 將切片放入抗原修復液中于電爐上加熱,不時用溫度計測量溫度,當達92℃后,即可拔離電源,當溫度低于92℃時,再插上電源,如此反復持續至10分鐘左右。
⑤待抗原修復液降至室溫后,PBS洗3次,隨后按選定的免疫組化染色方法進行染色。
對各種抗原修復方法的評價。
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