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染色特異性和敏感性的測定方法
(1)特異性染色和效價測定
直接染色法中效價以倍比稀釋如1:2、1:4、1:8……,與相應抗原標本作一系列染色,熒光強度在“+++"的zui大稀釋度,為其染色滴度(效價)或單位。實際染色時,可取低一個或兩個稀釋度(即2~4個單位),如染色效價為1:64,實際應用時可取1:32或1:16。間接染色法中效價可按抗核抗體熒光染色法步驟,先用不同稀釋度的熒光抗體染色,結果以抗核抗體熒光強度“++"為標準,染色用效價和直接法相同。
(2)非特異性染色測定
根據熒光抗體的用途不同,可用類似的抗原切片或涂片,倍比稀釋熒光抗體,按常規染色,結果在標本上出現的非特異染色應顯著低于特異性染色,否則應采取消除非特異性染色的方法處理熒光抗體。
(3)吸收試驗
在熒光抗體中加入過量相應抗原,于室溫中攪拌2h后,移入4℃冰箱過夜,3000r/min,離心30min,收集上清液,再用于相應抗原陽性標本染色,結果應不出現明顯陽性熒光。
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