實驗方法原理 淋巴細胞與用溴花二氨基異硫氫化物（簡稱AET）處理的綿羊紅細胞（SRBC）混合后，其中全部T淋巴細胞均能吸附AET—SRBC，形成牢固穩定而巨大的E—花環，較正常未處理的SRBC形成的E—花環百分比為高，而且形成快速，不易脫落，重復性好。再經淋巴細胞分層液分離時，AET—E花環易沉于管底，而未形成E—花環的T淋巴細胞，用低滲液解花環周圍的AET—SRBC，便可獲得純T淋巴細胞，而B淋巴細胞可直接取自分層液的界面。
實驗材料 新鮮豚鼠血
試劑、試劑盒 Hanks液小牛血清199培養液生理鹽水氯化鈉溶液
儀器、耗材 離心管離心機
實驗步驟
1. AET—RRBC制備
（1）AET溶液的制備
稱取AET粉劑402毫克，溶于10毫升蒸餾水中，使成為0.143 M 溶液，用4N NaOH溶液調pH9.0。該溶液必須新鮮配制，不宜久存。
（2） AET處理RRBC
取洗滌好壓積的RRBC，按一份壓積AET—RRBC加入4份新鮮配制的pH9.0的AET溶液充分混勻置37℃水浴15分鐘，每隔5分鐘搖勻一次。取出加冷無菌生理鹽水至離心管口（1~2厘米）1800轉/分離心5分鐘。連續洗滌3—5次，每洗一次，必須充分搖勻，以減少AET—RRBC粘附成團，并觀察有無溶血。若有溶血現象，則用含小牛血清的199培養基再洗一次，zui后配成10%AET—RRBC懸液，置4℃保存，不得超過5天。
（3）1%AET—RRBC的配制：
將預先配制并保存于4℃冰箱的10%濃度的AET—RRBC，以含10%小牛血清的199培養液稀釋至1%。
2. 從新鮮豚鼠血液分離單個核細胞，操作見后試驗。
3. AET—E花環試驗：
將分離的單個核細胞（2×106/毫升）與等量1%AET—RRBC混合，置37℃水浴15分鐘，每隔5分鐘搖勻一次，分裝數管，每管2—3毫升，低速離心（1000轉/分鐘）5分鐘后，移至4℃冰箱45分鐘。
4. T淋巴細胞和B淋巴細胞的分離
將形成E—花環的細胞懸液，再用淋巴細胞分層液分離，吸取界面云霧狀的細胞，即為富含B淋巴細胞群。沉淀于管底的E—花環，用Hanks液洗一次后，加雙蒸水3毫升處理3分鐘，低滲裂解E—花環周圍的RRBC，立即加3.5%氯化鈉溶液1毫升，使還原為等滲，低速離心沉淀，即得富含T淋巴細胞群。
