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卡邁舒生物今日技術*之—原代細胞骨架的染色方法

閱讀：198發(fā)布時間：2015-3-31

卡邁舒生物今日技術*之—原代細胞骨架的染色方法

微絲的顯示方法步驟：
      1. 用PBS液漂洗蓋片培養(yǎng)的原代細胞3次，每次30s；
      2. 用2%的甲醛/PBS液固定原代細胞3min；
      3. 用0.5%的PBS處理3次，每次10min；
      4. PBS漂洗3次；
      5. 用羅丹明（rhodamine）標記的鬼筆環(huán)肽（phalloidin）（1：10）室溫中反應15min；
      6. PBS漂洗3次；
      7. 60%甘油+熒光防淬劑封片；
      8. 熒光顯微鏡觀察；

微管的顯示方法：
      1. 用PBS液漂洗蓋玻片的原代細胞3次，每次30s；
      2. 在室溫中用3%甲醛/PBS固定20min；
      3. 用PBS液再漂洗3次，每次1min，zui后用濾紙吸干多余的PBS液；
      4. 投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；
      5. 用PBS漂洗3次，每次1min，zui后用濾紙吸干多余的PBS液；
      6. 向直徑6cm的干凈碟皿*滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的一級抗微管蛋白抗體，令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上，覆以皿蓋，于37℃溫箱中放置45min—1h；
      7. 向碟皿內勻速緩慢滴加PBS，令蓋片浮起在液面，用鑷子夾出，按步驟3處理；
      8. 向干凈碟皿*滴一滴濃度為0.1—0.2mg/ml的熒光標記的二抗，其后操作按步驟6進行；
      9. 按步驟7和3操作；
      10. 滴pH8.5的90%的甘油/PBS少許于載玻片上，把小蓋片的原代細胞面覆在大蓋片上；
      11. 將蓋片置于熒光顯微鏡下觀察；

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