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濾片

閱讀:121發布時間:2016-7-14

濾片

 

    流式細胞術中所用濾片有很多中,有中性濾片、帶通、帶阻、長波通,短波通、長波通二色性反射片等。中性無頻率特性,它對各波長的光線均勻哀減,常用在光線過強需要均勻哀減的地方。帶阻是濾除某一特定波長的光線,高于或低于此譜線的光不受影響。帶通的作用則正好相反,它只允許某一特定波長的光線通過,例如一個525nm帶通只允許FITC發射的525nm綠色熒光通過,而其他波長的熒光全部被阻斷。長波通只允許某一波長以上的光線通過而將此波長以下的光線濾掉,如620nm長波通只允許PI發射的紅色熒光通過,而488nm的激發光及FITC發射的525nm綠光全部被阻。長波通二色性反射鏡只允許某一波長以上的光線通過而將此波長以下的另一特定波長的光線反射。例如讓620nm以上的紅光通過而將525nm綠光反射,其他的光線則由鏡片吸收。這種二色性反射鏡有一定使用壽命,使用時需注意。

的用途大體上有二:

(1)、激發光波長應盡可能接近熒光染料的激發光譜峰值。當光源使用激光器時,可調節激光的波長選擇器選擇波長;但當光源是汞燈或其他廣譜光源時就要在激發光源前加來選擇激發光的波長。

(2)、檢測器應檢測盡可能純的和強的發射熒光。由于細胞在發射熒光的同時也有散射光,必須防止這部分散射光與熒光一起混入熒光探測器。另外,在多種熒光同時檢測時,每個熒光檢測器應只檢測一種染料發射的特定熒光,這時就要用系統阻擋住散射光,而對每個檢測器只允許一種波長的熒光信號進入而被檢測。選擇系統的依據就是要了解熒光染料的激發光譜和發射光譜。當用來探測兩種以上波長的熒光時,為了有效地使各種熒光分開,可采用二色性反射鏡。


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