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如何利用NGS來分析瀕危物種

閱讀:113發布時間:2015-7-28

美國鼠兔是一種可愛的小動物,圓滾滾,萌萌噠,人稱美國皮卡丘。由于它們對高溫非常敏感,故棲息在又高又冷的山區,而隨著氣候變暖,它們逐漸向更高的山區遷徙。這就為鼠兔的研究帶來了難題。

對于這個瀕危物種,研究人員不能采取強硬的手段來捕獲,而只能依靠非侵入性采集的樣本,比如毛發或糞便中的DNA。由于這些樣本中只含有少量的DNA,新一代測序技術是否適用,這可是個問題。

研究人員利用非侵入性的陷阱,從華盛頓州的北瀑布國家公園采集了12只鼠兔的毛發樣本。研究人員稱,這些樣本的平均起始DNA濃度為0.55 ng/μl,而有些樣本的DNA量甚至低于1 ng

他們采用nextRAD基因分型技術從美國鼠兔的樣本中收集SNP數據。這種Nextera tagmentation技術來自Illumina,它以轉座酶為基礎,同時完成DNA的片段化和接頭的添加,大大減少了所需的DNA起始量。他們從每個樣本中平均獲得1,863,634個測序讀取。

為了確保這些DNA來自鼠兔,他們將測序讀取定位回鼠兔基因組,發現16個樣本的相當一部分讀取對應了其他的小型哺乳動物,還有2個與人類匹配,1個來自玉米。

在其余67個樣本中,研究人員發現了3,803SNP,而異常值檢測發現37個位點在一個樣帶,18個在另一個樣帶。其中5個位點與已知功能的基因相關,包括ROR2基因,它參與了骨骼和神經發育以及細胞運動和細胞極性;HEPHL1基因,它似乎是鐵氧化酶;以及TMX4,一種跨膜蛋白。

研究人員指出,多態性位點的比例隨采樣點的不同而變化。與海拔中等和較高的點相比,在海拔較低的點采集的樣本也有著較少的多態性位點。他們認為,樣帶上的基因多態性也有著類似的趨勢。“我們發現遺傳變異與海拔顯著相關,海拔較低的地方也表現出較低的多態性水平,"研究人員寫道。

在金字塔峰(PP)樣帶的較低和中等海拔的點,研究人員發現了明顯的近親繁殖,不過在較高海拔的點卻沒有發現。同時,桑頓湖(TL)樣帶的所有點都表現出近親繁殖的證據。

研究人員認為,盡管他們能夠發現鼠兔中的遺傳變異,不過非侵入性采樣仍然具有挑戰性。例如,采樣過程必須盡量限制非目標DNA的采集,以及需要評估獲得的序列,以確保它們來自感興趣的物種。


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