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體內細胞培養及其操作步驟

閱讀:139發布時間:2015-7-23

1.瘤細胞懸液接種 
1)無菌選取生長良好瘤組織或對數生長期培養瘤細胞。    
2)在PBS中將瘤*碎后用勻漿器研磨,經80100目篩網過濾成細胞懸液。 
3)培養細胞應用PBS洗兩遍。 
4)計數并調整細胞濃度至107108ml 
5)常規消毒后,于接種部位。初次接種成功率低,細胞數盡可能多一些。 
6)次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期,以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短,zui后固定為一個相對穩定的時間。 
2.腹水瘤的建立與腹水瘤的接種 將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位,引起腹水,腹水中含有瘤細胞,將這種腹水反復傳代,即可成為腹水瘤。初次傳代時,腹水常呈血性,反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。 
1)將凍存或培養的腹水瘤細胞離心和洗滌,進行 細胞計數 。 
2)消毒動物,左下腹穿刺接種106腹水瘤細胞。 
3)接種腹水瘤細胞后約7~12d,待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部,用9號針頭抽取腹水,也可行腹部解剖后,用滴管吸取。每只小鼠可抽3~5ml 
4)抽取的腹水經3000rpm離心15min,收集上清,分裝凍存備用。


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