1. 挑選的培育基開發(fā)戰(zhàn)略
在細(xì)胞培育進(jìn)程中，培育基是操控產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)值和本錢的zui重要要素。有必要針對(duì)每種培育物來定制培育基，以優(yōu)化試驗(yàn)效果。在決議以哪種方式來開發(fā)您的培育基時(shí)，您有幾個(gè)挑選。您可以購(gòu)買現(xiàn)成的，自己開發(fā)，也可以與另一家公司合作開發(fā)特定的培育基。在這個(gè)進(jìn)程中，您需求考慮時(shí)刻和本錢等要素。
2. 制造干粉培育基時(shí)評(píng)價(jià)水的質(zhì)量
液體培育基往往會(huì)帶來比干粉培育基更高質(zhì)量的效果。這可能與水的質(zhì)量有關(guān)。由于細(xì)菌在水中敏捷成長(zhǎng)，故需求監(jiān)控內(nèi)毒素及其他污染物。商業(yè)公司有資源來監(jiān)控和操控細(xì)菌成長(zhǎng)，比方過濾器。因而運(yùn)用商業(yè)化出產(chǎn)的液體培育基會(huì)愈加可靠一點(diǎn)。
3. 利用細(xì)胞的代謝特性來優(yōu)化培育基
剖析運(yùn)用過的培育基，有助于判定必要成分的代謝速率，包含氨基酸和維生素。從細(xì)胞成長(zhǎng)階段和蛋白出產(chǎn)階段收集到的動(dòng)態(tài)代謝圖譜可用來平衡基礎(chǔ)培育基和增加培育基，指導(dǎo)培育基的要點(diǎn)，有助于蛋白質(zhì)的出產(chǎn)。
4. 防止細(xì)胞的過度消化
*經(jīng)過消化擔(dān)任讓細(xì)胞與容器結(jié)合的蛋白質(zhì)，而實(shí)現(xiàn)貼壁細(xì)胞的傳代。如果細(xì)胞暴露在*中時(shí)刻太長(zhǎng)，則*將開端切開細(xì)胞外表蛋白，這會(huì)影響細(xì)胞行進(jìn)正常功用的才能。
5. 培育基中不要一向運(yùn)用抗生素
跟著細(xì)胞培育物愈加頻頻地暴露在抗生素中，對(duì)抗生素有著天然耐藥性的菌株將開端呈現(xiàn)。這種現(xiàn)象可掩蓋潛在的污染，這對(duì)試驗(yàn)對(duì)錯(cuò)常有害的。
6. 保證一切試驗(yàn)室資料都無菌
交叉污染是細(xì)胞培育的大敵。即使是zui輕微的污染，也可能毀了幾個(gè)星期的效果。因培育箱內(nèi)溫暖濕潤(rùn)，真菌極易成長(zhǎng)，因而有必要留意定時(shí)清潔。此外，在將培育瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺(tái)之前，運(yùn)用酒精擦洗潔凈，以防止污染。
7. 當(dāng)心處理您的培育物
細(xì)胞培育的脆弱性怎樣著重也不為過。劇烈搖晃，或連續(xù)的溫度動(dòng)搖可能會(huì)對(duì)成長(zhǎng)產(chǎn)生晦氣的影響。保證培育箱是水平的，溫度均一，且遠(yuǎn)離電動(dòng)儀器。此外，盡量防止一次處理多個(gè)細(xì)胞系，由于它可能會(huì)影響細(xì)胞的基因型和表型。您還應(yīng)定時(shí)完結(jié)STR圖譜剖析，以承認(rèn)細(xì)胞系的身份。
8. 在運(yùn)用前正確凍結(jié)細(xì)胞
雖然凍結(jié)看起來是個(gè)簡(jiǎn)略的進(jìn)程，但有必要操作妥當(dāng)，以免損傷細(xì)胞。長(zhǎng)時(shí)刻暴露在高溫條件下會(huì)使細(xì)胞無法鋪板。因而，凍存管應(yīng)當(dāng)在37°C水浴中放置2分鐘，然后用條件培育基稀釋，以防止DMSO形成直接損傷。
9. 運(yùn)用對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的細(xì)胞
細(xì)胞培育進(jìn)程共有3個(gè)階段：停滯期、對(duì)數(shù)期和渠道期，分別代表了低細(xì)胞成長(zhǎng)、高細(xì)胞成長(zhǎng)和無細(xì)胞成長(zhǎng)。zui有生機(jī)的細(xì)胞是健康的，快速分裂的，在對(duì)數(shù)期以70-80%的集合度存在。
10. 在傳代之前不要讓細(xì)胞*集合
集合度是指貼壁細(xì)胞占有培育瓶外表積的比例。*集合意味著100%的外表都被貼壁細(xì)胞掩蓋。一定要防止這種狀態(tài)，由于它意味著細(xì)胞不能繼續(xù)成長(zhǎng)。不過，燃眉之急是運(yùn)用活潑成長(zhǎng)的細(xì)胞。
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