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技術(shù)文章

ELISA方法的首要操作程序

閱讀:241發(fā)布時(shí)間:2017-9-18

ELISA方法的首要操作程序?yàn)椋?br />(1)載體膜的預(yù)處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,稍加單調(diào)進(jìn)行壓圈。將陰性、陽(yáng)性抗原及被檢查抗原適度稀釋后參加圈中,置37℃使硝酸纖維素膜*單調(diào)。每張7cm×2.3cm的膜一般可點(diǎn)加40-53個(gè)樣品,每個(gè)壓圈可加抗原液1-20μl。
(2) 加酶標(biāo)抗體,37℃反響必定時(shí)刻后,用洗刷液洗三次。
(3)顯色參加新鮮制作的底物液,37℃反響必定時(shí)刻后,去掉底物液,加蒸餾水洗刷間斷反響。
(4) 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中,37℃感作15-30分鐘。封閉液多選用富含正常動(dòng)物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。
(5) 加被檢血清 可直接在抗原圈上加,也可剪下抗原圈、置于微量板孔中,再參加必定量適度稀釋的待檢血清,37℃反響必定時(shí)刻,用洗刷液洗三次,每次1-3分鐘。洗刷液一般為必定濃度的PBS-Tween溶液。
(6) 作用斷定 以陽(yáng)性、陰惡血清作為對(duì)照,膜片基地呈現(xiàn)深棕赤色斑駁者為陽(yáng)性反響,否則為陰性反響。

 


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