(TC)含量測試盒_脂肪酸代謝系列_分光光度法
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
TC包括游離TC和TC酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含TC之總和。
測定原理：
利用酯酶催化TC酯水解生成游離TC（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把TC酯轉(zhuǎn)化為FC；進一步利用CHOL氧化酶催化FC氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基酚，生成紅色醌類化合物；在500nm有特征吸收峰，其顏色深淺與TC含量成正比。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：異丙醇50mL（自備）。
試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體100μL×1瓶，4℃保存
TC標準品：液體1mL×1支，0.5μmol/mL，4℃保存。
TC的提取：
1、組織中TC的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清，即TC待測液。
2、細胞、細菌中TC的提取：先收集400-500萬細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s，停1s），即TC待測液。
3、血清（漿）等樣品：直接測定。
(TC)含量測試盒_脂肪酸代謝系列_分光光度法
測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到500 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. TC工作液的配制：臨用前，吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標準管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC標準液和900μL TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A標準管。
4. 測定管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC待測液和900μL TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
5. 空白管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL 試劑一和900μL TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A測定管。
注意：標準管和空白管只需測定一次。
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