脂肪酸代謝系列_總(TC)含量測(cè)試盒_微量法
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
TC包括游離TC和TC酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含TC之總和。
測(cè)定原理：
利用酯酶催化TC酯水解生成游離TC（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把TC酯轉(zhuǎn)化為FC；進(jìn)一步利用TC化酶催化FC氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；后利用過(guò)氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基和酚，生成紅色醌類(lèi)化合物；在500nm有特征吸收峰，其顏色深淺與TC含量成正比。
自備儀器和用品：
水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96孔板。
試劑組成和配置：
試劑一：異丙醇100mL（自備）；
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體40μL×1瓶，4℃保存；
TC標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，0.5μmol/mL，4℃保存。
脂肪酸代謝系列_總(TC)含量測(cè)試盒_微量法
TC的提取：
1、組織中TC的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清，即TC待測(cè)液。
2、細(xì)胞、細(xì)菌中TC的提取：先收集400-500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s），即TC待測(cè)液。
3、血清（漿）等樣品：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
1. /酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到500 nm。
2. TC工作液的配制：臨用前，吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在96孔板中加入20μL FC標(biāo)準(zhǔn)液和180μL TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：依次在96孔板中加入20μL FC待測(cè)液和180μLTC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
5. 空白管：依次在96孔板中加入20μL 試劑一和180μLTC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)定一次。
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