脂肪酸代謝系列_磷脂酶A2(PLA2)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
磷脂酶A2(EC3.1.1.4)是磷脂sn-2位脂酰基水解酶,廣泛存在于動植物組織、細(xì)菌、細(xì)胞核分泌物中,參與脂肪消化,精子成熟、細(xì)胞信號傳遞、脂質(zhì)過氧化修復(fù)、宿主反應(yīng)等生理過程,在控制體內(nèi)磷脂類物質(zhì)平衡、調(diào)節(jié)機體新陳代謝、參與疾病的病理進程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。
脂肪酸代謝系列_磷脂酶A2(PLA2)測試盒
測定原理:
磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸(HEPC)產(chǎn)生游離巰基,與DTNB反應(yīng)生成物質(zhì),在412nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平、超速冷凍離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體×5瓶,-20℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加入1.8mL試劑二充分混勻;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
樣品處理:
1.組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
2.細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后于4℃,10000g離心5min,取全部上清于4℃、100000g離心30min,棄上清,取沉淀溶于1mL試劑一。
3.血清:直接測定。