丙酮酸羧化酶(PC)測試盒_糖異生系列_分光法
測定方法：分光光度法
產品規格：50管/48樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1)廣泛存在于動物、霉菌和酵母的線粒體中，催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，是糖異生過程的個限速酶，在保證血糖的動態平衡方面起著重要的作用。
測定原理：
PC催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+，在340nm下測定NADH氧化速率，即可反映PC活性。
需自備的儀器和用品：
分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體47 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：液體32.8μL×1支，4℃保存；
試劑三：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、稱取約0.1g組織或收集500萬細菌或細胞，加入1mL提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g，4℃離心5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的PC（此步可選做）。
5、在步驟④的沉淀中加入1mL提取液，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于線粒體PC活性測定。
丙酮酸羧化酶(PC)測試盒_糖異生系列_分光法
測定步驟：
1、分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
2、工作液的配制：臨用前將試劑二和試劑三轉移到試劑一中混合溶解待用；置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱5分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、試劑四的配制：在試劑四瓶中加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
4、在1mL石英比色皿中加入50μL樣本、50μL試劑四和900μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初
始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.5，需將樣本用提取液稀釋適當倍數后測定，使ΔA小于0.5可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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