磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶測試盒_糖異生系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
PEPC(EC 4.1.1.31)廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳反應生成草酰乙酸呈不可逆反應的酶,對三羧酸循環的運轉起重要調節作用。
測定原理:
PEPC催化磷酸烯醇式丙酮酸和CO2生成草酰乙酸和HPO42-,蘋果酸脫氫酶進一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋果酸和NAD+,在340nm測定NADH減少速率,計算PEPC活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶測試盒_糖異生系列
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體30 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:液體10 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑三:粉劑×2支,-20℃保存,臨用前加入4mL蒸餾水充分溶解待用;現配現用。
試劑四:粉劑×1支,-20℃保存,臨用前加入5mL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。
試劑五 :原液20μL×1支,4℃保存;
試劑五:稀釋液10mL×1瓶,4℃保存;
樣本的前處理:
1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣品:直接檢測。