氧化與抗氧化系列_二胺氧化酶測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/48樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛,其活性與核酸和蛋白合成密切相關,能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。
氧化與抗氧化系列_二胺氧化酶測試盒
測定原理:
DAO催化尸胺產生醛和過氧化氫,外源添加過量的辣根過氧化物酶,催化過氧化氫氧化鄰聯茴香胺生成氧化型鄰聯茴香胺,在460nm處有特征吸收峰,通過測定該波長吸光度增加速率,計算DAO活性。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體120mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體0.3mL×1支,4℃保存。
試劑二:液體2.5mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體1.2mL×1管,4℃保存。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測。
2.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3.血清等液體:直接測定。
注意事項:
1、如果OD值小于0.01,適當加大提取用樣本量;OD值大于0.8,粗酶液可適當稀釋,或者減少提取用樣本量。
2、樣品蛋白質含量需要另外測定。