其它系列_肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/96樣
注 意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
CAD是木質素生物合成途徑中的關鍵酶之一,是木質素單體合成反應中的后一步,催化多種不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成與之相應的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。
其它系列_肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒
測定原理:
CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體25 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,-20℃保存;
粗酶液提取:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定
(1)在試劑二中加入10mL試劑一充分溶解混勻,室溫使用渦旋振蕩儀振蕩溶解15min,如未溶解可適當延長振蕩時間;置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min;現配現用(配好后24h內用完);
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑二,混勻,立即記錄340nm處初始吸光值A1和 5min后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。