P450系列_紅-霉素N脫甲基酶(ERND)測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的酶系,在外源物質代謝中,尤其是藥物和毒物的代謝,具有重要作用。ERND在P450酶系中相當于CYP2B亞型,與藥物代謝的去甲基化密切相關。CYP2B具有催化底物形成非活性易于排泄的代謝產物而具有解毒作用,也可使某些藥物經CYP2B代謝活化。
P450系列_紅-霉素N脫甲基酶(ERND)測試盒
測定原理:
ERND催化紅-霉素釋放甲醛,通過Nash比色測定甲醛含量,即可計算出ERND活性。
自備儀器和用品:
普通離心機,超速離心機、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水和冰。
試劑組成和配置:
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加100mL蒸餾水溶解。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1管,4℃保存。臨用前加1mL蒸餾水,充分溶解。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加0.5mL蒸餾水,充分溶解。
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前,加蒸餾水4.5mL充分溶解。
試劑六:液體×1瓶,4℃保存。
試劑七:液體×1瓶,4℃保存。
標準液:液體×1瓶,-20℃保存。臨用前取1.5mL EP 管,加入10μl標準液,加990μl蒸餾水,混勻即為0.05 mmol/L標準甲醛-溶液,4℃保存。
粗酶液提取:
1、除去細胞核,線粒體等大分子物質:稱約0.5g組織,加入1mL試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃離心30min,取上清液,轉入超速離心管中。
2、粗制微粒體:100 000g,4℃,離心60min,棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質:向步驟2的沉淀中加1mL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。
4、終微粒體:向步驟3的沉淀中加試劑二0.5mL,充分震蕩溶解,即粗酶液,待測。該待測液需當天使用。