雙縮脲法蛋白含量測試盒_蛋白-含量系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意 : 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定,確保蛋白濃度在1~10mg/ml范圍內。
測定意義:
樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。
雙縮脲法蛋白含量測試盒_蛋白-含量系列
測定原理:
強堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物;紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。該方法測定范圍為1~10mg蛋白質,適用于蛋白質濃度高的樣品,尤其是動物材料。
自備儀器和用品:
離心機、可見分光光度計、移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
標準品:液體1mL×1瓶,5 mg/mL,4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質提取:
1.液體樣品:澄清無色液體樣品可以直接測定。
2.組織樣品:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(自備,根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水))
冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即待測液。(動物樣品常常需要稀釋)
3.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min,調節波長到540 nm,蒸餾水調零。
2. 空白管:取1 mL玻璃比色皿,加入200μL蒸餾水,1000μL試劑一,混勻后室溫靜置15 min,于540nm比色,記為A空白管。
3. 標準管:取1 mL玻璃比色皿,加入200μL標準液,1000μL試劑一,混勻后室溫靜置15 min,于540 nm比色,記為A標準管。
4. 測定管:取1 mL玻璃比色皿,加入200μL待測液,1000μL試劑一,混勻后室溫靜置15 min,于540nm比色,記為A測定管。
注意:空白管和標準管只需測定一次。