酸性蛋白酶(ACP)測試盒_蛋白-酶系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/24樣
注 意: 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
ACP是一種在酸性環境下催化蛋白質水解的酶。該酶主要用于酒精發酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。
酸性蛋白酶(ACP)測試盒_蛋白-酶系列
測定原理:
酸性條件下,ACP催化酪蛋白水解產生酪-氨酸;在堿性條件下,酪-氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍;鎢藍在680nm有特征吸收峰,通過測定其吸光度增加,來計算ACP活性。
自備儀器和樣品:
可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1mL玻璃比色皿、1.5 mL EP管和蒸餾水。
試劑組成和配置:
液體一:1.5mL×1支,4℃保存。
液體二:1mL×1支,4℃保存。
試劑一的配制:臨用前按液體一:液體二:蒸餾水=76(μL):17(μL):18(mL)的比例配制,現配現用,如出現白色絮狀沉淀則不能用。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加10 mL蒸餾水溶解。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入20 mL試劑一,沸水浴中磁力攪拌溶解。(可在燒杯上蓋一層保鮮膜,注意觀察,避免水分全部蒸發,一般加熱15-30分鐘,該試劑為過飽和試劑,充分混勻后仍出現顆粒物不溶物不影響使用)。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入50 mL蒸餾水溶解。
試劑五:液體10mL×1瓶,4℃保存。
標準品:液體1mL×1支,0.25 μ mol/mL標準酪-氨酸溶液,4℃保存。
粗酶液提取:
1. 試劑一的配制:見試劑的組成和配制。
2. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。
3. 血清或培養液:直接測定。
4. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。