堿性蛋白酶(AKP)測試盒_蛋白-酶系列
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/24樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質肽鍵水解的酶類,屬于絲-氨酸蛋白酶。此外,該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵,具有轉酯及轉肽的功能。該酶是主要工業用酶之一,廣泛應用于制藥、絲綢、食品、制革等行業。
堿性蛋白酶(AKP)測試盒_蛋白-酶系列
測定原理:
在堿性條件下,AKP水解酪蛋白生成酪-氨酸;在堿性條件下,酪-氨酸還原磷鉬酸生成鎢藍;鎢藍在680nm有特征吸收峰,測定680nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1.5 mL EP管、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體90mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加10 mL蒸餾水溶解。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入20 mL試劑一,沸水浴中磁力攪拌溶解。(可在燒杯上蓋一層保鮮膜,注意觀察,避免水分全部蒸發,一般加熱15-30分鐘,該試劑為過飽和試劑,充分混勻后仍出現顆粒物不溶物不影響使用)。
試劑四:粉劑×1瓶, 4℃保存。臨用前加50 mL蒸餾水溶解。
試劑五:液體10mL×1瓶,4℃保存。
標準品:液體1mL×1支,0.25 μ mol/mL標準酪-氨酸溶液,4℃保存。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。
2.血清或培養液:直接測定。
3.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。