氧化磷酸化系列_線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ
測定方法：微量法
產品規格：100管/96樣
注 意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
線粒體復合體Ⅲ（EC 1.10.2.2）又稱CoQ-還原酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中，是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負責把還原型CoQ的氫傳遞。
氧化磷酸化系列_線粒體呼吸鏈復合體Ⅲ
測定原理：
與氧化型不同，還原型在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復合體Ⅲ酶活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：液體20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體1.5mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，-20℃保存；
試劑六：液體2.5mL×1瓶，-20℃保存；
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g，4℃離心5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅲ（此步可選做）。
5、步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅲ酶活性測定。
測定步驟：
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至550nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定
（1）工作液的配制：將試劑五轉移到試劑四中混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、25μL試劑六和200μL工作液，立即混勻，記錄
550nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
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