磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI)測試盒_光合作用系列
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
植物葉綠體中磷酸丙糖異構(gòu)酶是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮之間的轉(zhuǎn)化，磷酸二羥丙酮能快速透過葉綠體的包膜進入細(xì)胞質(zhì)，并在其中逐步轉(zhuǎn)化為蔗糖。
磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI)測試盒_光合作用系列
測定原理：
磷酸丙糖異構(gòu)酶將磷酸二羥丙酮轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油醛，3-磷酸甘油醛與NAD在3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH，340nm處的吸光度變化反映了磷酸丙糖異構(gòu)酶的活性的高低。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、研缽、震蕩儀、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿。
試劑組成和配制：
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
酶液提取：
①總TPI酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定。
②胞漿和葉綠體TPI酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿TPI酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中TPI酶活性。
建議測定總TPI酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的TPI，則按照步驟②提取粗酶液。
測定操作：
1.分光光度計預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2.取1mL石英比色皿，依次加入600μL試劑一，100μL試劑二，100μL試劑三，100μL試劑四，100μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A(chǔ)1和310s的吸光值A(chǔ)2，△A=A2-A1
環(huán)保在線