氨基酸代謝系列_谷氨-酰胺合成酶(GS)測試盒
測定方法:微量法
產品規格:100管/48樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物體內氨同化的關鍵酶之一,催化銨離子和谷-氨酸合成谷氨-酰胺,不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性,而且谷氨-酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
氨基酸代謝系列_谷氨-酰胺合成酶(GS)測試盒
測定原理:
GS在ATP和Mg2+存在下,催化銨離子和谷-氨酸合成谷氨-酰胺;谷氨-酰胺進一步轉化為γ─谷氨?;惲u肟酸,在酸性條件下與鐵形成的絡合物在540nm處有大吸收峰,可用分光光度計測定。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:10mL×1瓶,-20℃保存;臨用前37℃預熱20min,充分混勻,如有沉淀,靜置10min,取上清待用。
試劑二:10mL×1瓶,-20℃保存;臨用前37℃預熱20min,充分混勻,如有沉淀,靜置10min,取上清待用。
試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。用時每瓶加入5mL蒸餾水充分溶解待用。
試劑四:15mL×1瓶,4℃保存。
樣本測定的準備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。