ELISA試劑盒試驗(yàn)室質(zhì)量管理的要素是挑選和履行適當(dāng)?shù)氖覂?nèi)質(zhì)量操控(internal quality control,IQC)程序，例如根據(jù)測(cè)定項(xiàng)意圖質(zhì)量要求和辦法特色挑選核算學(xué)規(guī)范、操控規(guī)矩和質(zhì)控品的數(shù)目，并嚴(yán)格履行IQC程序以進(jìn)步IQC的質(zhì)量。室內(nèi)質(zhì)控辦法許多，但酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)中仍首要選用Levey-Jennings質(zhì)控圖。筆者長(zhǎng)時(shí)間從事免疫學(xué)查驗(yàn)質(zhì)量管理工作。發(fā)現(xiàn)醫(yī)院、血站查驗(yàn)科在實(shí)踐工作中存在一些比較遍及的問(wèn)題或疑問(wèn)。根據(jù)本身實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合相關(guān)專(zhuān)著，扼要介紹如下，供試驗(yàn)室參閱。
1.質(zhì)控品準(zhǔn)預(yù)備
1.1 質(zhì)控品濃度 以需求質(zhì)控的點(diǎn)設(shè)值進(jìn)行質(zhì)控，般在Cut-of值(即CO值，是由試劑盒供給的公式核算出的陰、陽(yáng)性判別規(guī)范)鄰近選點(diǎn)。主張選點(diǎn)辦法。挑選S/CO值減去精密度測(cè)定中得到的3倍批間CV與S/CO值的乘積(意即3倍s)仍大于1的質(zhì)控血清作為判別試驗(yàn)室重復(fù)性的室內(nèi)質(zhì)控點(diǎn)。
1.2 購(gòu)買(mǎi)質(zhì)控品主張用戶購(gòu)買(mǎi)質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量操控，這樣的質(zhì)控品的穩(wěn)定性更有確保。首要項(xiàng)目在衛(wèi)生部臨床查驗(yàn)中心都有長(zhǎng)時(shí)間供給(北京東單大華路1號(hào)北京醫(yī)院內(nèi)衛(wèi)生部臨床查驗(yàn)中心免疫質(zhì)量操控室，：1O0730)
1.3 自制質(zhì)控品的制備辦法 (1)搜集陽(yáng)性血清(無(wú)顯著溶血、黃疽、脂血或污染血清)，累積到一定數(shù)量(夠本室運(yùn)用6月以上)；(2)混勻，經(jīng)56℃ lO小時(shí)滅活，(3)離心或過(guò)濾，去除纖維沉淀物(4)用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋?zhuān)筍/CO值到達(dá)2～4之間(5)與定值參閱品進(jìn)行比照，求測(cè)定值(6)將質(zhì)控血清按0.2～O.5毫升/支分裝、封口、貼簽，置-2O℃保存。
2.ELISA試劑盒怎么正確運(yùn)用“立刻法”進(jìn)行質(zhì)控不能隨意運(yùn)用“立刻法”，以下情況下可運(yùn)用：(1)試驗(yàn)室不是每天進(jìn)行ELISA項(xiàng)意圖查驗(yàn)，而ELISA試劑盒效期短．用一批號(hào)試劑盒接連慣例檢測(cè)2O次以取得RCV數(shù)據(jù)難度較大。選用“立刻法”質(zhì)控核算辦法，只需接連測(cè)3次，即可對(duì)第3次查驗(yàn)成果進(jìn)行質(zhì)控；(2)在某一檢測(cè)項(xiàng)目開(kāi)端預(yù)備展開(kāi)Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控，沒(méi)有完結(jié)RCV測(cè)定時(shí)運(yùn)用，其意圖是盡早啟動(dòng)室內(nèi)質(zhì)控，在展開(kāi)lI缶床試驗(yàn)的一起進(jìn)行RCV測(cè)定，以便在獲取滿足數(shù)據(jù)后轉(zhuǎn)入Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控。因?yàn)閿?shù)據(jù)量小，質(zhì)控規(guī)矩單一，“立刻法”質(zhì)控辦法可靠性相對(duì)較差。在運(yùn)用該質(zhì)控辦法時(shí)，有必要加強(qiáng)試驗(yàn)全程監(jiān)控以確保質(zhì)量，并在獲取滿足數(shù)據(jù)后及時(shí)轉(zhuǎn)入Levey-Jennings室內(nèi)質(zhì)控。試驗(yàn)室需求替換質(zhì)控品批號(hào)時(shí)，應(yīng)提早開(kāi)端下一批號(hào)質(zhì)控品RCV靶值和規(guī)范差的測(cè)定，盡量防止運(yùn)用“立刻法”質(zhì)控辦法。
3.質(zhì)控規(guī)矩的挑選
一般以x靶±2s為正告限，以x靶士3s為失控限(這是*的判別試驗(yàn)成果是否失控的準(zhǔn)則)，取得“慣例試驗(yàn)室質(zhì)量操控圖”空?qǐng)D。每次(或每天)隨患者樣本測(cè)定的質(zhì)控物值，標(biāo)記在質(zhì)控圖上。分析質(zhì)控圖中每天檢測(cè)質(zhì)控標(biāo)本的成果散布，判別當(dāng)天檢測(cè)的成果數(shù)值是否在操控限之內(nèi)。各試驗(yàn)室挑選失控*，應(yīng)根據(jù)本室條件進(jìn)行選定。失控限制得太寬，幾乎不用憂慮有失控可能，這樣常將失控成果誤判為合格，使質(zhì)控失掉含義；相反，失控限制得太嚴(yán)，使太多的成果乃至合格的成果判為失控，這也使質(zhì)控失掉含義。根據(jù)本室條件，設(shè)定失控限，是室內(nèi)質(zhì)控重要的環(huán)節(jié)。Westgard多規(guī)矩質(zhì)控分析法：在質(zhì)控圖中，單純根據(jù)質(zhì)控點(diǎn)超出2s為正告，超出3s為失控，在臨床查驗(yàn)中已顯不行。Westgard將常用的判別失控的規(guī)矩總結(jié)出許多條規(guī)矩，挑選質(zhì)控規(guī)矩時(shí)有必要統(tǒng)籌室內(nèi)質(zhì)控對(duì)失控的檢出才能及誤判失控的可能性。在免疫學(xué)查驗(yàn)質(zhì)控中，主張?jiān)囼?yàn)室挑選運(yùn)用以下
幾種質(zhì)控規(guī)矩：(1)13s:1個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在士3s之外；(2)R4s：接連2個(gè)質(zhì)控點(diǎn)相差超出4s規(guī)模；(3)41s:接連4個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在同一側(cè)士1s之外；(4)7x靶：接連7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在均值之一側(cè)；(5)7t：接連7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)呈接連上升或下降，或周期性動(dòng)搖改變。質(zhì)控規(guī)矩還有許多，各試驗(yàn)室可根據(jù)自己的實(shí)踐情況挑選質(zhì)控規(guī)矩。
4．替換試劑批號(hào)的處理方式
因?yàn)镋LIsA試劑的效期相對(duì)較短，而在冷凍條件下，免疫質(zhì)控血清效期相對(duì)較長(zhǎng)，一個(gè)批號(hào)的質(zhì)控血清往往要幾個(gè)批號(hào)的試劑才會(huì)用完，因而試驗(yàn)中常會(huì)遇到替換試劑批號(hào)后怎么處理質(zhì)控圖的問(wèn)題。替換不同廠家的試劑有必要從頭核算RCV(在替換前完結(jié)RCV的測(cè)定，以免中止室內(nèi)質(zhì)控)。替換相同廠家不同批號(hào)的試劑，運(yùn)用質(zhì)控血清濃度值上下相鄰的系列質(zhì)控血清驗(yàn)證新批號(hào)試劑S/CO值的一致性。引薦對(duì)不同批號(hào)試劑間系列血清成果回歸方程進(jìn)行比較，以取得兩批試劑間的換算因子，能夠在同一質(zhì)控圖上持續(xù)描點(diǎn)。當(dāng)換算因子為1時(shí)，運(yùn)用實(shí)測(cè)S/CO值作圖。從理論上說(shuō)，兩個(gè)回歸方程經(jīng)核算學(xué)查驗(yàn)差異無(wú)核算學(xué)含義時(shí)，能夠連續(xù)運(yùn)用上批號(hào)質(zhì)控圖。
5.分批質(zhì)控辦法
進(jìn)行大批量標(biāo)本的檢測(cè)時(shí)存在批內(nèi)變異與批間變異的問(wèn)題。有的試驗(yàn)室每天需測(cè)驗(yàn)數(shù)百人的血清樣品，運(yùn)用數(shù)塊乃至數(shù)十塊微孔板這就存在同一天檢測(cè)數(shù)塊板之間的變異(批內(nèi)變異)和不同天檢測(cè)之間的變異(批間變異)的問(wèn)題。引薦進(jìn)行免疫試驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控的批內(nèi)、批間室內(nèi)質(zhì)量操控具體辦法如下(以1 ncu/ml抗-HIV舉例)。
5.1 每天進(jìn)行多個(gè)酶標(biāo)板檢測(cè)，每板均進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本測(cè)定，核算室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)本的S/CO值，見(jiàn)表1。核算上表各板質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)均數(shù)的均值和規(guī)范差時(shí)需遵從RCV的核算準(zhǔn)則。2o d均值的均數(shù)和規(guī)范差，即為批間變異的靶值和規(guī)范差()，以操控天間變異，也稱(chēng)批間變異,以2O天的規(guī)范差的均值作為批內(nèi)規(guī)范差，以20天均值的均值作為批內(nèi)靶值()，以操控天內(nèi)不同檢測(cè)批之間的變異，也稱(chēng)批內(nèi)變異。
5.2 ELISA試劑盒批內(nèi)和批問(wèn)Levey-Jennings質(zhì)控圖的繪圖辦法批內(nèi)Levey-Jennings質(zhì)控圖用每個(gè)酶標(biāo)板質(zhì)控S/CO值描點(diǎn)，以調(diào)查和操控各板之問(wèn)的變異。批內(nèi)Levey-Jennings質(zhì)控圖描點(diǎn)描在一張質(zhì)控圖上(留意區(qū)分，作好相應(yīng)記錄)，便于調(diào)查質(zhì)控成果的會(huì)集趨勢(shì)和離散程度，也能夠按完結(jié)檢測(cè)批的先后順序描在數(shù)張質(zhì)控圖上，每天按相應(yīng)批對(duì)應(yīng)作圖。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖用宣布陳述時(shí)現(xiàn)已完結(jié)的各個(gè)酶標(biāo)板質(zhì)控S/CO值的均值描點(diǎn)，以操控日間變異。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖繪圖辦法可能有不斷定的時(shí)分，如完結(jié)批或第二批時(shí)，可能不知道是否還有第三批乃至第四批(關(guān)于醫(yī)院體系尤其可能發(fā)生，因?yàn)楫?dāng)天標(biāo)本數(shù)量不能斷定，而先完結(jié)的陳述不可能等一切標(biāo)本完結(jié)檢測(cè)后才宣布)，筆者主張能夠以當(dāng)時(shí)已有質(zhì)控S/CO值的均值描點(diǎn)，作為當(dāng)時(shí)批間Levey-Jennings質(zhì)控圖，以判別已完結(jié)檢測(cè)成果的質(zhì)控狀況；當(dāng)有新的質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)發(fā)生后，與前述質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)(如有失控，則應(yīng)剔除失控的質(zhì)控S/CO值),核算S/CO值均值并描點(diǎn)，作為新的閱覽Levey-Jennings質(zhì)控圖，以判別新完結(jié)檢測(cè)成果的質(zhì)控狀況。批間Levey-Jennings質(zhì)控圖描點(diǎn)與批問(wèn)Levey-Jennings質(zhì)控圖描點(diǎn)一樣，既能夠會(huì)集在一張質(zhì)控圖上作圖，也能夠按完結(jié)檢測(cè)批的先后順序分隔作圖。