ELISA試劑盒在 ELISA 中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶聯絡物后。抗原抗體反應的結束需求有必定的溫度和時間，這一保溫進程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA 中似不恰當。
ELISA 屬固相免疫測定，抗原、抗體的聯絡只在固相表面上發生。elisa試劑盒以抗體包被的夾心法為例，參與板孔中的標本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗聯絡的時機，只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的進程，因此需經渙散才華抵達反應的結束。在這今后參與的酶符號抗體與固相抗原的聯絡也相同如此。這便是為何ELISA 反應老是需求必定時間的溫育。
ELISA試劑盒保溫的方法有 ELISA 儀器附有特制的電熱塊，一般均選用水浴，可將ELISA 板置于水浴箱中，ELISA 板底應貼著水面，使溫度靈敏平衡。為防止蒸騰，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA 板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性出色的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA 板放在濕紗布上。
濕盒應先放在保溫箱中預溫至規矩的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能靈敏平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴峻限制在規矩的范圍內，規范室溫溫度是指 20-25℃，但具體操作時可根據說明書的懇求控制溫育。室溫溫育時，ELISA 板只需平置于操作臺上即可。應留心溫育的溫度和時間應按規矩力求準確。為保證這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一同測定。
ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有 43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體聯絡的適宜溫度。在建立ELISA 方法作反應動力學研討時，實驗標明，兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2 小時，產品的生成可達。為加速反應，可進步反應的溫度，有些實驗在 43℃進行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中，以構成zui多的堆積。但因所需時間太長，在ELISA 中一般不予選用。
ELISA試劑盒一個出色的實驗操作環境可以保證ELISA試劑盒測定成果更準確。實驗操作的嚴謹性與實驗操作規范密不可分，未運用的試劑應儲存于2-8℃，運用時應回溫到室溫（20-25℃）。切忌不同批次的試劑混合運用，要常常檢查酶標儀和微量移液器的精度盒預備度，這么才華保證實驗的可操作性。