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試劑盒的保留辦法與質量有著極大的聯絡,有不少教師反映出在保留血清的時分會遇見“什么溫度zui合適”“怎么防止沉積物呈現”等等疑問。而試驗新手們在保留科研血清時也難免會遇見一些突發疑問,那么咱們要怎么見機行事呢?我公司技術員特別將常見疑問整理出分享給咱們:
1. 問:保留血清的辦法是怎么的呢?
答:咱們主張血清應保留在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,主張您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
2. 問:怎么凍結血清才不會使產質量量受損?
答:咱們主張您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但有必要留意的是,融解過程中有必要規矩地搖晃均勻。
3. 問:血清凍結后發現有絮狀沉積物呈現,該怎么處理?
答:血清中沉積物的呈現有很多種因素,但zui遍及的因素是由于血清中脂蛋白的變性所構成,血纖維蛋白(構成凝血的蛋白之一)在血清凍結后,也會存在于血清中,亦是構成沉積物的主要因素之一。但這些絮狀沉積物,并不影響血清自身的質量。 若您欲去掉這些絮狀沉積物,能夠將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著參加培育基內一同過濾。咱們不主張您以過濾的辦法去掉這些絮狀沉積物,由于它也許會堵塞您的過濾膜。
4. 問:為何要熱滅活科研血清?
答:加熱能夠滅活補體體系。發動的補體參加溶解細胞事情,影響平滑肌縮短,細胞和血小板開釋組胺,發動淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研討,培育ES細胞,昆蟲細胞平和滑肌細胞時,引薦運用熱滅活血清。
5. 問:有必要做熱滅活嗎?
答:試驗顯現,通過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的成長只要微小的推進,或*沒有任何效果,甚至一般由于高溫處理影響了血清的質量,而構成細胞成長速率的下降。而通過熱處理的血清,沉積物的構成會明顯的增多,這些沉積物在倒置顯微鏡下調查,像是“小黑點”,常常會讓研討者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37 ℃環境中,又會使此沉積物更增多,使研討者誤認為是微生物的擴增。 因而咱們主張您,若非有必要,您能夠不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節約您名貴的時刻,更保證血清的質量!
6. 問:為何貯存在冰箱中的血清會呈現沉積?
答:咱們的胎牛血清沒有預老化,貯存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)也許集合而構成沉積或可見的混濁。這應當不會影響血清的質量。引薦在-20℃貯存胎牛血清,防止反復凍融。
溫馨提示:
1. 凍結血清時,請依照所主張的逐步凍結法(-20℃至4℃至室溫),若血清凍結時改動的溫度太大(如-20℃至37℃),試驗顯現非常簡單發作沉積物。
2. 凍結血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,削減沉積的發作。
3. 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,一起血清中很多較不穩定的成分也會因而受到損害,而影響血清的質量。
4. 若有必要做血清的熱滅活,請恪守56℃,30分鐘的準則,而且隨時搖晃均勻。溫度過高,時刻過久或搖晃不均勻,都會構成沉積物的增多。
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