ELISA實驗的原理似乎很簡單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個實驗。

【ELISA試劑盒需要遵循的3個要點】
1.抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學活性;
2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;
3.酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，可根據已知濃度的抗原或抗體的顏色反應的深淺繪制標準曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物，經第二次孵育后，酶結合物就會與*次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒 的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。

【怎樣更好的發揮ELISA試劑盒的效果】
●在使用過程校正加樣器；10ul以下加樣器采用進口產品（芬蘭、法國等）； 
● 仔細校正溫度到37℃，水浴箱為佳；
●必須使用去離子水或蒸餾水，不得用自來水、礦泉水等。
●認真閱讀使用說明書。  樣品加樣  
● 加樣不準確；  
●沒有混勻。  
●加樣時一定要仔細。加樣后，再檢查，以防漏加、錯加。  
●加樣后，反復抽吸
●次混勻，防止血清聚集孔底，導致非特異性吸附。  洗滌  洗滌不*  
●每次注水洗滌，應靜止30秒鐘；  
●選用吸水紙作為襯墊，每次洗滌后扣干孔內水分； 
●可選用塑料洗滌瓶。  加酶反應 漏加 滴加后，認真檢查各孔  結果判斷  
●包括陰性對照孔在內，各孔顯色普遍偏深； 
●包括陽性對照在內，各孔均無顯色；  
●陽性對照不顯色，而其它樣本顯色正常； 
●有些標本顯色不深，判斷陽性困難。  
● 可能是洗滌不充分；加樣過量；溫育時間過長溫度過高；按說明書重新操作。如無改善， 可與生產廠家； 
●可能是漏加樣本或酶液；溫育時間過短溫度過低；試劑保存不當活性下降；按說明書重新 操作。如無改善，可與生產廠家；  
●陽性對照漏加、錯加或失效。重新操作。如無改善，可與廠家，索要對照品； 
● 重新操作。使用酶標儀，測定光吸收度，按P/N值標準判斷。  ELISA試劑盒保存 保存不規范 一定要在2-8℃存放。不得過高，也不得凍存（凍存后，酶液將失效）。  對照品 對照品為凍干品 按對照管標示，加入相應體積的去離子水或蒸餾水復溶，充分溶解混勻。可按說明書使用。Elisa試劑盒瓶中齊全，質量有保障。