新年的開(kāi)始中，我司技術(shù)專(zhuān)員為ELISA試劑盒新手入門(mén)的使用技術(shù)報(bào)告做出一番整理，在這里分享給您，供參考。
◎ELISA方法原理
  1.雙抗體(原)夾心法：檢測(cè)抗原(體)的常見(jiàn)方法，應(yīng)用針對(duì)抗原兩個(gè)不同決定族的兩種單抗分別作為固相載體和酶標(biāo)抗體檢測(cè)溶液中的抗原(適用于二價(jià)以上抗原，不能測(cè) 小分子半抗原)。
  2.間接法：檢測(cè)抗體的方法，利用酶標(biāo)記的抗抗體(第二抗體)檢測(cè)已與固相抗原結(jié)合的抗體。
  3.競(jìng)爭(zhēng)法：檢測(cè)抗原或小分子半抗原、抗體，以測(cè)抗原為例，使待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合，結(jié)果如待測(cè)抗原含量越多，與固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原就越少，顯色越淺，二者呈負(fù)相關(guān)。
◎操作注意
  ① 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
  ② 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
  ③ 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
◎ELISA試劑盒質(zhì)控分析
  1.人員培訓(xùn)內(nèi)容包括：①檢驗(yàn)項(xiàng)目的基本原理(ELISA試劑盒原理)；②熟悉檢測(cè)技巧，了解易出差錯(cuò)的環(huán)節(jié)及難點(diǎn)；熟悉檢測(cè)試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；③熟悉檢測(cè)儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識(shí)；④某些特殊項(xiàng)目的檢測(cè)如抗HIV等需經(jīng)有關(guān)部門(mén)組織的專(zhuān)門(mén)培訓(xùn)班，考試合格后持證上崗。
  2.基本了解
    ① 1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術(shù)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)發(fā)展為ELISA試劑盒技術(shù)。
    ② 特點(diǎn)：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。
    ③ 酶標(biāo)記免疫活性物質(zhì)，進(jìn)行信號(hào)放大；
    ④ 有二步溫育反應(yīng)二次洗滌過(guò)程；
    ⑤ 靈敏度特異性相對(duì)較高。
    ⑥ 局限性：只能檢測(cè)到ng水平
    ⑦ 精密度差(批內(nèi)CV15-20%)；
    ⑧ 線性范圍窄(一個(gè)數(shù)量級(jí))；
    ⑨ 存在"HD-HOOK"效應(yīng)。