試驗(yàn)采用改良過(guò)碘酸鈉法將辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記在抗體上，標(biāo)記完后取上清用Sephedex G200凝膠層析進(jìn)行純化，洗脫液為0.2mol/LpH7.4的PBS，流速為15mELISA試劑盒l(wèi)/h，分步收集，每支3ml，以紫外分光光度計(jì)測(cè)A280吸光度值，以洗脫體積為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)做圖，ELISA試劑盒收集*峰即為酶標(biāo)抗體峰。
標(biāo)記完后用紫外分光光度計(jì)在分別在280nm、及403nm處測(cè)定酶標(biāo)記物的A值，計(jì)算免疫球蛋白量、摩爾比值、酶結(jié)合率以及標(biāo)記率。包被用緩沖液及zui適包被抗原濃度的優(yōu)化包被緩沖液的優(yōu)化
包被抗原時(shí)，為了得到*的包被效果，我們采用了碳酸鹽緩沖液（50mM ph9.6 ）、磷酸鹽緩沖液（50mMph7.6）、以及TRIS鹽酸緩沖液（50 mM ph7.6）三種緩沖液作為包被液，抗原包被濃度為5ug/ml，及2.5ug/ml,酶標(biāo)抗體工作濃度為1：400及1：300，ELISA試劑盒用自動(dòng)酶標(biāo)儀小鼠ELISA試劑盒分析，選擇*的包被緩沖液系統(tǒng)。同時(shí)為了保證緩沖液能夠經(jīng)久保存，在包被液中添加了0.01%的硫柳汞作為防腐劑。