在競爭法ELISA試劑盒中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應zui為敏感。在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標本(S)和陰性對照(N)的A值后，計算S/N值。

    也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性(positive)，而是病人(patient)的縮寫，不應誤解。為避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性標準，現多為各種測定所沿用。實際上每一該用求出各自的S/N的閾值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，以致反應后產生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此，這類ELISA試劑盒規(guī)，如N<0.05(或其他數值)，則按0.05計算，否則將出現假陽性結果。

抑制率表示標本在競爭結合中標本對陰性反應顯色的抑制程度，按下式計算：
抑制率(%)= (陰性對照A值-標本A值)×100%/陰性對照A值
ELISA試劑盒一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性，<50%為陰性。