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通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法:
1、血清:血清是常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
2、血漿:用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本。
標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
3、細胞培養上清:取細胞培養上清到離心管。
1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
4、細胞裂解液
5、組織勻漿液
6、尿液、唾液等其他液體生物樣本
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標記的抗原或抗體,稱為"結合物"(conjugate);(3)酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。
雙抗體夾心法是檢測抗原常用的方法,操作步驟如下:
1、將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2、加受檢標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
3、加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4、加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色,測知標本中抗原的量。
以上就是關于ELISA檢測樣品的處理方法,如果你還有什么不清楚的地方可以給我們留言或者聯系在線客服咨詢!
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