1.基本原理 

將質粒 DNA 導入細菌的過程稱為轉化（ Transformation ）。此感受態細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中脹大為球狀（感受態細菌的制備，見前）。質粒 DNA 與 CaCl 2 構成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于細菌表面，經 42℃ 短時刻熱沖擊處理，促進細胞吸收 DNA 復合物。在豐富培育基上生長數小時后，球狀細胞恢復并分裂增殖。被轉化的細菌中，外源基因得到表達。在選擇性培育平板上，可選出所需的轉化子（即含有質粒 DNA 的細菌）。鈣處理的感受態細胞，一般每微克 DNA 能取得 10 5 ～ 10 6 個轉化子。除化學辦法轉化細菌外，還有電穿孔法（ Electroporation ），其轉化率可高達 10 9 ～ 10 10 個轉化子 /μg 質粒 DNA 。

2.器材 

①培育皿  ②恒溫培育箱

3.試劑 

① LB 培育基

②選擇性 LB 瓊脂培育平板（含氨芐青霉素，終濃度為 50μg/ml ）

③氨芐青霉素 100 mg/ml

④宿主細菌：經 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態細菌 DH5α

4.操作過程 

①取 50 μL 大腸桿菌感受態細胞，參加適量質粒（體積不得超過 4 μL ）冰浴 30 min 后， 42℃ 熱激 90 s ，馬上放回冰上，冰浴 2 min ；

②加 400 μL LB 培育基，于 37℃ 搖床慢搖振動培育 45-60 min ；

③取 50-100 μL 涂在含有氨芐青霉素（ 100 μg/mL ）的 LB 固體培育基上， 37℃ 倒置培育過夜。

上海紀寧實業以高度的責任感和出色的產質量量為客戶供給高質量的產品和試驗技能解決方案。豐富的經驗、質量、足夠的庫存、準確的交貨時刻、競爭力的價格，一切這些確保了咱們向您供給的專業的服務。*，一切ELISA試劑盒均以超低折扣價讓利客戶，全程免費技能指導，供給免費代測服務，歡迎新老客戶來dian咨詢概況。