Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的試驗診斷方法。因為其試劑安穩(wěn)、易保存，操作簡便，成果判別較客觀等要素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗的各領(lǐng)域中。ELISA檢測試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

在試驗中，樣品的制備也是非常重要的，操作欠好可能會影響試驗成果，究竟該怎么制備樣品呢？接下來小編就帶你看看ELISA樣品制備的方法吧！

1.細(xì)胞培育物上清液

①將培育基移至離心管， 4℃， 1,500 rpm 離心 10 分鐘；

②當(dāng)即進(jìn)行上清液的分裝（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能削減重復(fù)凍融次數(shù)。

2.細(xì)胞提取物

①將安排培育板放置在冰上；

②吸出培育基并用預(yù)冷PBS 輕輕洗滌細(xì)胞一次；

③吸出 PBS ，參加100 mm 培育板參加0.5ml*提取緩沖液；

④搜集細(xì)胞至在歪斜板中，然后移至通過預(yù)冷的離心管中；

⑤短暫渦旋后在冰上孵育 15-30 分鐘；

⑥在 4℃ 下13,000 x rpm 離心 10 分鐘，沉積不溶性內(nèi)容物；

⑦將上清液（這里是指可溶性細(xì)胞提取物）分裝至預(yù)冷的離心管中，并于 -80℃ 保存，盡可能削減重復(fù)凍融次數(shù)。

3.條件培育基

①將細(xì)胞接種到*（含血清）成長培育基中，使細(xì)胞增殖達(dá)到一定的交融率；

②棄去培育基，數(shù)毫升預(yù)熱PBS 當(dāng)心洗滌，重復(fù)洗滌步驟；

③棄去PBS 洗滌液并當(dāng)心參加無血清培育基；

④孵育 1-2 天；

⑤將培育基移至離心管， 4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘；

⑥當(dāng)即分裝上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能削減重復(fù)凍融次數(shù)。

4.乳汁

①搜集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；

②分裝上清液并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能削減重復(fù)凍融次數(shù)。

5.血漿

①將全血搜集到含抗凝劑的管中，例如 BD 抗凝真空采血管或增加 0.1M 檸檬酸鈉至 1/10 終體積；

②4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘；

③當(dāng)即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能削減重復(fù)凍融次數(shù)。

6.尿液

①搜集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；

②等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能削減凍融循環(huán)次數(shù)。

7.唾液

①搜集樣品并在 4℃ 下以 10,000 x g 離心 2 分鐘；

②當(dāng)即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能削減重復(fù)凍融次數(shù)。

8.血清

①將全血搜集到未經(jīng)處理的測試管中，或許到不含抗凝劑的管中，如 BD 血清用真空采血管；

②在室溫下連續(xù)孵育 20 分鐘；

③4℃ 3,000 rpm 離心 10 分鐘；

④當(dāng)即分裝上清液（血漿）并在 -80℃ 下保存樣品，盡可能削減重復(fù)凍融次數(shù)。

9.安排提取物

①用潔凈的東西解剖安排，best好在冰上、趕快進(jìn)行，以避免被蛋白酶降解；

②將安排置于圓底的微量離心管中，并浸入液氮中進(jìn)行“速凍”，將樣品保存在 -80℃ 下以便后續(xù)運用或放置在冰上進(jìn)行直接勻漿；

③對于約 5 mg 的安排片，可向管中增加約 300 μl *提取緩沖液（檢查細(xì)胞/安排提取緩沖液配方），然后用電動勻漿器勻漿；

④清洗刀片兩次，每次清洗運用 300μl *提取緩沖液，然后在 4℃ 下維持恒定拌和 2 小時（例如置于冷室中的回旋振蕩器上）；

⑤4℃ 13,000 x rpm 離心 20 分鐘。置于冰上，將上清液（這里是指可溶的蛋白質(zhì)提取物）分裝至新、預(yù)冷的管中并在 -80℃ 下保存樣品。盡可能削減重復(fù)凍融次數(shù)。