談到ELISA的優(yōu)點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)操作者們可以隨口說(shuō)出。也正是因此，使得ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)室中得到廣泛的應(yīng)用范圍。但是，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響受到多方面因素。而試劑盒產(chǎn)品的選擇也很重要，甚至*體現(xiàn)不出ELISA實(shí)驗(yàn)的意義與優(yōu)點(diǎn)。那么如何運(yùn)用豚鼠ELISA試劑盒可將優(yōu)點(diǎn)放到zui大呢？且聽(tīng)上海豐壽為您道來(lái)……

一、論洗滌的重要性
1. ELISAzui后一次洗滌一定要*！這一過(guò)程不是是反應(yīng)聚，但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵！在ELISA測(cè)定的反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。洗滌如不*，特別在zui后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。

2. 洗板方法的選擇
① 自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
② 手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推選的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

陰性和空白值高有幾種可能：
① 酶標(biāo)抗體濃度過(guò)高
② 顯色時(shí)間太久，顯色溫度過(guò)高(可以試一下室溫)
③ 板條封閉不*
④ 板條吸附性太強(qiáng)，造成本底過(guò)高

在沒(méi)有洗板機(jī)的情況下，手洗需要注意幾點(diǎn)：
① 一定要甩液，垂直和斜甩都不要緊，只要能保證一次將孔中的液體甩盡就好了。
② 選用的拍板紙不起碎屑的就可以了（防止到孔中影響結(jié)果測(cè)定）。
③ 洗板時(shí)每次用洗液浸泡1-2min，共洗5次就差不多了。

豐壽建議：拍板時(shí)可以注意使用腕部的力量，而且不需要用太大的力氣。

3. 洗滌參數(shù)
洗滌量：自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果您之前遭遇過(guò)高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。ELISA板的制造商通常會(huì)在試劑盒的使用手冊(cè)中列出包被量。行業(yè)中通常使用的包被量是200 μl。

如果您你的試劑盒也是這樣，那么制造商可能會(huì)建議使用300 μl洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來(lái)說(shuō)，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。

4. 清洗液
一般采用0.01Mol/L pH 7.2 PBS吐溫緩沖液。吐溫是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質(zhì)，常做助溶劑。吐溫的編號(hào)依聚合山梨醇所結(jié)合的脂肪酸種類(lèi)不同而定。吐溫20是結(jié)合月桂酸、吐溫40是結(jié)合棕櫚酸、吐溫60是結(jié)合硬脂酸，吐溫80是結(jié)合油酸等。通常用吐溫20加入緩沖液內(nèi)做為濕潤(rùn)劑，以減少非特異性吸附。也可在PBS緩沖液中加入1%牛血清白蛋白(或10%小牛血清或卵清蛋白)，特別在抗原包被以后，以牛血清白蛋白緩沖液再包被一次，而占據(jù)孔內(nèi)剩下位置，這樣來(lái)減少非特異性反應(yīng)。    
    
二、ELISA的反應(yīng)時(shí)間
抗原與抗體、抗體與酶標(biāo)抗體反應(yīng)一般在37℃ 2h～3h達(dá)到高峰。時(shí)間太短，敏感性下降，時(shí)間太長(zhǎng)，吸附的抗原或復(fù)合物(在這個(gè)溫度下)可能脫落。 

ELISA是用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或者標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物顯色。底物在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，計(jì)算樣品濃度。 

上海豐壽公司向廣大用戶(hù)提供產(chǎn)品的同時(shí)，始終將客戶(hù)服務(wù)和放在比產(chǎn)品銷(xiāo)售更重要的位置上，公司聘請(qǐng)了專(zhuān)職人員，為客戶(hù)提供豚鼠ELISA試劑盒專(zhuān)業(yè)性、個(gè)性化的技術(shù)服務(wù)。