如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的elisa試劑盒提高到新水平。

  上海豐壽在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低于實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。

（三）間接法測抗體

間接法是檢測抗體*常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。ELISA試劑盒操作步驟如下：

（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。

（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由于不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。

（3）加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，ELISA試劑盒可用酶標羊抗人IgG抗體。

（4）加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。
用戶選用試劑盒，主要是為了及時得到可靠的數據。因此，試劑盒實用性是用戶選購試劑盒的考慮。從實用的角度來看，豐壽牌試劑盒必須滿足下述要求。
 
（1）質量可靠。在研發過程中選擇測定方法，反復優化測定體系、測定條件和操作步驟，并且進行多種生物樣品的實際測定驗證，以確保測定的專一性、靈敏度、重復性和回收率；在生產過程中實行嚴格的質量控制，主要試劑選擇國外生產商，并且從固定供應商處購買，生產人員經過系統經久培訓，并且建立了嚴格的質量追溯體系。豐壽生物實行先用后付方法，即用戶滿意后才付款。萬一出現質量問題，豐壽生物及時免費提供新試劑盒。
 
（2）操作簡便快捷。首先，測定方法以分光光度法為主，并且可以用酶標儀測定，保證絕大多數用戶都有相應的儀器和操作經驗。其次，保證測定結果可靠的基礎上科學簡化操作步驟，例如，根據反應步驟配制工作液，顯著減少了用戶加液次數，盡量統一加試劑的體積，顯著減少用戶調移液器的次數等等。*后，操作說明簡潔明確，用戶一看就懂。
 
（3）規格合理。試劑盒中通常由必須現用現配的試劑。如果保證過大，用戶一天內不能用完，會造成試劑浪費。因此，常量法豐壽牌試劑盒以50T/48S規格為主，絕大多數用戶能夠一天內用完。微量法大規格包裝可以節省用戶經費。因此，豐壽牌試劑盒也有大包裝試劑盒，其中需要現用現配的試劑，采用分裝成幾個試劑瓶的方法，方便用戶分次使用。
 
（4）系列成套，便于用戶選擇。豐壽生物緊跟研究熱點，針對某個研究主題，優選測定指標，全面滿足用戶進行該主題研究的需要。