樣本處理:
血清(漿):直接測定,如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。 ②、培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,1000 轉/分,離心 10 分鐘,取上清測定。
[注]:一般建議細胞密度在 100萬個/ml以上。 ③、組織樣本:準確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的勻漿介 質,冰水浴條件下機械勻漿,2500 轉/分,離心 10 分鐘,取上清液待測。
[注]:1、如組織樣本為非高脂樣本,勻漿介質統(tǒng)一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進行提取。
檢測低密度脂蛋白和高密度脂蛋白時候的樣本處理資料!
2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質可統(tǒng)一用無水乙醇進行提取。
細胞樣本: A、細胞收集:將制備好的細胞懸液取出,1000 轉/分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細胞沉 淀;用等滲緩沖液(推選0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液)清洗1~2 次,同樣1000 轉/分,離心10 分鐘,棄上清液,留細胞沉淀;
B、細胞破碎:加入 0.2~0.3ml 的勻漿介質(推選 0.1mol/L、pH7~7.4磷酸鹽緩沖液或生理 鹽水)進行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,3~5 秒/次,間隔 30 秒,重復 3~5 次)或手動勻漿,制備好的勻漿液不離心直接測定。也可采用裂解液裂解(推選 TritonX-100,1~2%,裂解 30~40分鐘),裂解好的液體不離心直接測定。
[注]:一般建議細胞密度在 100萬個/ml以上。破碎好的液體可顯微鏡觀察細胞是否破碎*。
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