ELISA試劑盒測定現一般為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定形式，測定操作十分簡略，一般涉及到標本的搜集保留、試劑預備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、成果判別和成果陳述及解釋等方面，其間任一過程的不妥都會影響測定成果，且尤以加樣、溫育和洗板等過程為甚。現分述如下。    
一、標本的搜集和保留    
用于ELISA測定的標本zui為常用的是血清（漿），有時由于特定的檢查意圖，也用到唾液、腦脊液、尿液、大便等標本。如今上運用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和醫治藥物等。對用于激素和醫治藥物測定的血清標本的搜集，要留意搜集時刻甚或體位有也許會對測定成果發生影響。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值呈現：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發性辦法開釋，因而，在測定此類激素時，有必要在親近相連的時刻間隔內采納數份血樣本，以其間間值為測定值。又如當從臥位變為站立位時，血清中腎素活性將呈現明顯增高。再如醫治藥物的檢查，應根據藥代動力學挑選服藥后的zui適時刻抽血檢查。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢查的血清標本的搜集則沒有時刻和體位方面的影響。 
ELISA試劑盒要思考以下幾個方面：    
（1）要留意防止呈現嚴峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有相似過氧化物的活性，因而，在以HRP為符號酶的人ELISA試劑盒測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。    
（2）樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細菌污染，一則細菌的生長，其所排泄的一些酶也許會對抗原抗體等蛋白發生分化效果；二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會對用相應酶作符號的測定辦法發生非特異性干擾。    
（3）血清標本如是以無菌操作別離，則可以在2～8℃下保留一星期，如為有菌操作，則主張冰凍保留。樣本的長時刻保留，應在-70℃以下。    
（4）冰凍保留的血清標本須留意防止因停電等形成的重復凍融。標本的重復凍融所發生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子發生破壞效果，然后引起假陰性成果。此外，凍融標本的混勻亦應留意，不要進行劇烈振蕩，重復倒置混勻即可。     
（5）標本在保留中如呈現細菌污染所造成的的混濁或絮狀物時，應離心沉積后取上清檢查。  
二、試劑預備     
在試驗室，對試劑預備一般不太留意，一般的做法是，在試驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而疏忽了這種做法有也許影響后邊溫育時刻不行的疑問，其直接的結果是對一些弱陽性標本的檢查呈現假陰性。因而在ELISA測定中試劑的預備zui為要害的是，在試驗開端前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進行測定，以使試劑盒在運用前與室溫平衡。這樣做的意圖，首要是為了在后邊的溫育反響過程中，能使反響微孔內的溫度能較快地到達所請求的高度，以滿意測定請求。其次，如今的產品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗室運用時對所供給的濃縮液稀釋制造，因而稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應保證質量。此外，當試劑盒以OPD為底物時，則底物溶液應在反響顯色前暫時制造。    
三、ELISA試劑盒加血清樣本及反響試劑    
在如今的人ELISA試劑盒產品試劑盒中，血清樣本的參加幾乎是僅有的要運用微量加樣器參加樣本的過程，運用微量加樣器加樣有必要留意的要害點。?