1. 加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加中止液。加標(biāo)本時有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，以免穿插污染。加酶結(jié)合物、底物和中止液時則不需更換吸嘴。

2. 在成批手工檢測中，還應(yīng)留心操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留心可能會導(dǎo)致錯誤成果或定量禁絕。

3. 跟著病情的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)生大幅動搖，因此有必要對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。直接法測定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反應(yīng)。

4. 判定成果須運(yùn)用ELISA試劑盒測讀儀，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，依據(jù)反應(yīng)液色彩的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反應(yīng)孔的吸光度值。酶標(biāo)儀具有杰出的重復(fù)性。  

5. 洗刷是ELISA試劑盒操作過程中決定試驗(yàn)勝敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除掉未結(jié)合的免疫反應(yīng)物，中止抗原抗體反應(yīng)，除掉標(biāo)本中與反應(yīng)無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。可用洗板機(jī)洗板或手工洗板，前者洗刷質(zhì)量較好，各反應(yīng)孔洗刷效果均一，批內(nèi)、批間差異小，手工洗板應(yīng)留心控制各孔洗刷效果，差異不宜太大。