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在處理和保存方面要考慮以下幾個方面:
(1)要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。
(3)血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。
(5)標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。
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酶免疫測定
酶免疫測定(enzyme immunoassay)可分為均相(homogenous)和非均相(heterogenous)兩種類型。在均相EIA中可不需進行游離的和結合的標記物的分離而直接測定標記物。例如在某種條件下,抗原抗體反應后形成的酶標記抗原抗體復合物中的酶失去其對底物作用的活力,因而測出的酶活力直接反映游離的酶標記物。均相EIA在臨床檢驗中較少應用。非均相EIA需*行游離的和結合的標記物的分離。如前所述,固相載體可用作一種分離手段。這種固相酶免疫測定方法在1971年zui初建立時稱為酶聯免疫吸附劑測定(enzyme linked immunosorbent assay),簡稱ELISA,在國內有譯作酶聯免疫吸附試驗的,雖然含義不*確切,但已習用。
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