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江蘇科特商貿有限公司

RNA純化方法及沉淀

時間:2015-5-25閱讀:396
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    RNA純化要求---RNA樣品中不應存在對(如逆轉錄酶)有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子,避免其他生物大分子如蛋白質,多糖和脂類分子的污染,排除DNA分子的污染。

    一、RNA純化方法及沉淀---有機溶劑抽提法

    1、氯仿抽提

    在使用RNA提取試劑進行RNA提取時,常使用氯仿進行抽提,以去除蔗糖、蛋白質等雜質,并促進水相與有機相的分離,從而達到純化RNA的目的。氯仿抽提RNA后,一般采用異丙醇或乙醇來沉淀水相RNA。加入0.6倍水相體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇,室溫沉淀20-30min,高速離心,可獲得RNA沉淀。

    2、洗滌沉淀

    加入無RNase75%乙醇,將RNA沉淀震蕩懸浮,使RNA沉淀中的鹽離子被充分溶解。然后在離心10-30min,再次沉淀RNA。離心后,小心倒掉上清(注意不要倒出RNA沉淀),隨后短暫離心,將殘留在管壁上的乙醇收集到管底后,用小槍頭吸凈,超凈臺中風干1-2min(注意不要太干,否則RNA沉淀不易溶解)。

    3、溶解沉淀

    加入適量RNase-Free Water溶解RNA沉淀。

    二、RNA純化方法及沉淀---硅基質吸附法

    隨著實驗方法的改進,現已發展出一種采用吸附材料純化核酸的方法。目前較常見的有:硅基質吸附材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。硅基質吸附材料因其具有可特異吸附核酸,使用方便、快捷,不使用有毒溶劑如*、氯仿等優點,成為核酸純化的。


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