當前位置: 江蘇綠葉生物科技有限公司>>技術文章>>CRISPR編輯iPS細胞的脫靶情況
CRISPR基因編輯和iPS重編程是近年來的兩大熱點技術。CRISPR/?Cas9已經在多個領域中展現了自己強大的特異性基因靶標能力。而iPS重編程在構建疾病模型和新藥開發中有著很高的應用價值。將CRISPR應用到iPS細胞中去,似乎是一件大勢所趨的事情。
在人iPS細胞中進行了CRISPR基因編輯。將全基因組測序和靶向深度測序結合起來,評估了?Cas9編輯iPS細胞時的脫靶效應,還鑒定了一個影響Cas9特異性的單核苷酸變異(SNV)。
Cas9核酸酶的潛在脫靶效應,一直是CRISPR技術用于臨床的一個主要障礙。為此,研究人員通過CRISPR/?Cas9系統在人類誘導多能干細胞(iPSC)中敲除了Tafazzin基因,效率達到54%。
上海隆壘生物科技有限公司對?Cas9編輯過的人類iPSC進行了全基因組測序,結果并未發現顯著的基因組改變或突變率提高。研究人員還深度測序了計算機模擬的Cas9脫靶位點,進一步驗證了?Cas9的高特異性。
上海隆壘生物科技有限公司研究人員發現,常見的生殖細胞系單核苷酸變異(SNV),會生成脫靶位點影響基因編輯的特異性。他們對人類基因組的這種SNV進行了評估,發現它生成脫靶位點的可能性大約為1.5–8.5%。據介紹,這種SNV的突變率并不高,可能也不會產生功能性影響。
上海隆壘生物科技有限公司研究為人們展示了用CRISPR/?Cas9在iPS細胞中進行高特異性基因編輯的可行性。文章指出,在設計CRISPR編輯之前*行全基因組測序是很有價值的。
發表了*直接基因組測序方法,該文章中的一些策略現在仍應用在二代測序技術中。此外,如今的多重化分子技術和條碼式標簽也是他發明的。Church還是納米孔測序技術的之一。
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