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外周血細胞瑞氏(Wright)染色及計數實驗

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正血液常規檢查是臨床使用zui多的化驗項目,其中白細胞分類計數又是血常規中必做化驗之一。目前,我國各地醫院化驗室在做白細胞分類計數時,其血涂片多采用瑞氏(Wright’s)染色法。瑞氏染料中有美藍和伊紅兩種成分,前者為堿性,后者為酸性,它們與細胞內的各種物質具有不同的親和力,使其顯現出不同的色調。

實驗方法

  • 涂片法
實驗方法原理瑞氏染料中有美藍和伊紅兩種成分,前者為堿性,后者為酸性,它們與細胞內的各種物質具有不同的親和力,使其顯現出不同的色調。血細胞核由去氧核糖核酸和強堿性的組蛋白、精蛋白等形成核蛋白。這種強堿性的物質與瑞氏染料中的酸性染料伊紅有親和力,所以染成紅色;核蛋白中還有少量的弱酸性蛋白,它們又與染液中的堿性染料美藍起作用而染成藍色,但含量太少,藍色反應極弱 ,故核染色呈現紫紅色。較幼稚的細胞之胞漿和細胞核之核仁中含有酸性物質,它們與染料中的堿性染料美藍有親和力,故染成藍色。
實驗材料

血液

試劑、試劑盒

瑞氏染料純甲醇磷酸二氫鉀*

儀器、耗材

顯微鏡玻片蓋玻片滴管

抗體

Hamster IgG3, λ抗體
Hamster IgG3, λ抗體
Hamster IgG3, λ抗體

實驗步驟

1.  制作血涂片

(1)滴一小滴血(約5 ul)于干凈玻片上,推片與玻片應呈約30°角,用力均勻而較快,且不可復推。

(2)如血滴較小,推得較慢,角度小于30°,所制涂片較薄。

(3)如血滴較大,推得較快,角度比30°大時,則所制涂片較厚。


2.  將標本放平(置于一個固定架上),用滴管將染液滴于涂片上,可用滴管將染液驅散,使其布滿整個涂片。

3.  染液布滿整個涂片后,稍等片刻或立即加入緩沖液,并使緩沖液與染液混均勻。


4. 染液與緩沖液的比例

(1)染液量要充足,否則染液很快蒸發,將染料沉淀于細胞上。

(2)染液與緩沖液的比例為1:2~4左右比較合適。

(3)稀釋度越大,染色時間越長,細胞著色較好,反之則越差。


5. 染色時間:視具體情況而定,一般約需10~30分鐘。


6. 沖洗:用自來水沖洗涂片上之染料。


7. 顯微鏡檢查:待自然干燥后用光學顯微鏡檢查。

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