FOR RESEARCH USE ONLY

Drug Names

Generic Name：四環(huán)素檢測(cè)試劑盒

This kit can be used for determination of serum, plasma and liquid samples Organization Content.

四環(huán)素檢測(cè)試劑盒The experimental principle:

The product levels were measured in samples of the kit by double antibody sandwichmethod. The product with the purified antibody coated microtiter plate, made of solid phase antibody, to package is the product antigen monoclonal antibodies are then added to the micropores, the product and then with HRP labeled antibody binding, the formation of antibody - antigen - antibody complex enzyme label, after thorough washing with TMB chromogenic substrate. TMB in the HRP enzyme catalytic conversion into the blue, and in the action of acid into the final yellow. This product is positively related to the depth of color and in the samples. Instrument measured absorbance in the 450nm wavelength with ELISA (OD), the product concentration in the samples was calculated by standard curve.

Materials provided with the kit

Specimen requirements

• serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
• cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant.
• extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
• Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.

Assay procedure

1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separay. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 240ng/L,160ng/L ,80ng/L,40ng/L, 20ng/L)

2.add sample：Set blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.

3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.

4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.

5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.

6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except  blank well. 

7.incubate：Operation with 3.

8.washing：Operation with 5.

9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃

10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).

11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.

Important notes

• The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
• washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
• add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
• if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
• Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
• The substrate evade the light preservation.
• Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.
• All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.
• Do not mix reagents with those from other lots.

Calculate：

Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.

Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

其它產(chǎn)品

11301    BBL 瓊脂培養(yǎng)基BBL 寒天培地BBL Agar Medium    250g/瓶    用于雙歧桿菌分離培養(yǎng)
11302    PYG 液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)PYG 流動(dòng)培地基礎(chǔ)PYG Broth Medium Base    250g/瓶    用于雙歧桿菌乙酸和乳酸代謝物測(cè) 定，每  100ml  培養(yǎng)基中添加  1  支21301 和 1 支 21319
11303    TPY 液體培養(yǎng)基TPY 流動(dòng)培地TPY Broth Medium    250g/瓶    雙歧桿菌 F6PPK 測(cè)定
11304    MRS 培養(yǎng)基（改良 MRS 培養(yǎng)基基礎(chǔ)）MRS 培地MRS Medium(Modified MRS Medium Base）    250g/瓶    用于乳酸菌平板計(jì)數(shù)，每  100ml  培 養(yǎng)基中添加  1  支  21302  制成改良 MRS 培養(yǎng)基
11305    MC 培養(yǎng)基（改良 MC 培養(yǎng)基基礎(chǔ)）MC 培地Chalmers Agar(Modified Chalmers Agar Base）    250g/瓶    用于乳酸菌平板計(jì)數(shù)，每  100ml  培 養(yǎng)基中添加 1 支 21201 制成改良 MC 培養(yǎng)基
11306    雙歧桿菌生化管用基礎(chǔ)培養(yǎng)基ビフィズス菌生化管基礎(chǔ)培地Bifidobacterium Biochemical tests Base Medium    100g/瓶    雙歧桿菌糖發(fā)酵生化試驗(yàn)
11307    MRS 肉湯MRS ブイヨンMRS Broth    250g/瓶    用于乳酸菌增菌
11308    改良番茄汁瓊脂培養(yǎng)基変法トマトジュース寒天培地Tomato Juice Agar,Modified    250g/瓶    用于乳酸菌總數(shù)測(cè)定
11309    TPY 瓊脂培養(yǎng)基TPY 寒天培地TPY Agar Medium    250g/瓶    用于雙歧桿菌的分離培養(yǎng)
11310    雙歧桿菌 BS 培養(yǎng)基ビフィズス菌 BS 培地Bifidobacterium BS Medium    250g/瓶    用于雙歧桿菌的分離培養(yǎng)
11311    BLB 培養(yǎng)基BLB 培地BLB Medium    250g/瓶    用于雙歧桿菌的分離培養(yǎng)
11312    乳酸桿菌選擇性瓊脂（LBS 瓊脂）LBS 寒天Lactobacillus Selective Agar    250g/瓶    用于乳酸菌的選擇性分離和培養(yǎng)，每1L 培養(yǎng)基中需添加 1.32ml 冰乙酸
11313    乳酸桿菌選擇性肉湯（LBS 肉湯）LBS ブイヨンLactobacillus Selective Broth    250g/瓶    用于乳酸菌的選擇性培養(yǎng)，每 1L 培 養(yǎng)基中需添加 1.32ml 冰乙酸
11314    M17 瓊脂M17 ブイヨンM17 Agar    1000ml/瓶    用于牛奶和乳制品中乳酸菌的檢測(cè)， 并分離被噬菌體感染的乳酸菌
11315    M17 肉湯M17 ブイヨンM17 Broth    1000ml/瓶    用于牛奶和乳制品中乳酸菌的檢測(cè)
11316    APT 瓊脂APT 寒天APT Agar    250g/瓶    用于乳酸菌的分離培養(yǎng)
11317    APT 肉湯APT ブイヨンAPT Broth    250g/瓶    用于異質(zhì)發(fā)酵乳酸桿菌和其它需高 含量鹽酸硫酸胺素菌的培養(yǎng)

38

11318    Raka-Ray 3 號(hào)培養(yǎng)基Raka-Ray 3 號(hào)培地Raka-Ray 3# Medium    250g/瓶    用于啤酒和釀造過(guò)程中乳酸菌的分 離
11319    溴甲酚紫平板計(jì)數(shù)瓊脂BCP 加プレートカウント寒天培地Plate Count Agar with BCP    250g/瓶    用于乳酸菌總數(shù)測(cè)定
11320    含糖牛肉湯培養(yǎng)基    250g/瓶    用于乳酸菌培養(yǎng)和鑒別
11321    含糖牛肉湯瓊脂培養(yǎng)基    250g/瓶    用于乳酸菌計(jì)數(shù)
11322    含糖牛肉湯瓊脂培養(yǎng)基（含碳酸鈣）    250g/瓶    用于乳酸菌計(jì)數(shù)
11323    LAMVAB 瓊脂基礎(chǔ)    250g/瓶    用于乳酸桿菌的分離，每  100ml  培 養(yǎng)基中添加 1 支 21501