牛溶菌酶LysozymeELISA試劑盒FOR RESEARCH USE ONLY

Drug Names

Generic Name：牛溶菌酶LysozymeELISA試劑盒

      This kit can be used for determination of serum, plasma and liquid samples Organization Content.

The experimental principle:

The product levels were measured in samples of the kit by double antibody sandwichmethod. The product with the purified antibody coated microtiter plate, made of solid phase antibody, to package is the product antigen monoclonal antibodies are then added to the micropores, the product and then with HRP labeled antibody binding, the formation of antibody - antigen - antibody complex enzyme label, after thorough washing with TMB chromogenic substrate. TMB in the HRP enzyme catalytic conversion into the blue, and in the action of acid into the final yellow. This product is positively related to the depth of color and in the samples. Instrument measured absorbance in the 450nm wavelength with ELISA (OD), the product concentration in the samples was calculated by standard curve.

Materials provided with the kit

Specimen requirements

• serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
• cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant.
• extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
• Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.

Assay procedure

1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separay. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 240ng/L,160ng/L ,80ng/L,40ng/L, 20ng/L)

2.add sample：Set blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.

3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.

4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.

5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.

6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except  blank well. 

7.incubate：Operation with 3.

8.washing：Operation with 5.

9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃

10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).

11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.

Important notes

• The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
• washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
• add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
• if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
• Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
• The substrate evade the light preservation.
• Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.
• All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.
• Do not mix reagents with those from other lots.

Calculate：

Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.

Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

其它產品QYP1531    兔抗人、大鼠、小鼠Actin               
QYP1532    鼠抗人、大鼠、小鼠αSarcomeric Actin              
QYP1533    鼠抗人、大鼠、小鼠αSmooth muscle Actin               
QYP1534    兔抗人α1-Antichymotrypsin                
QYP1535    兔抗人α1-Antitrypisin               
QYP1536    鼠抗人AFP                
QYP1537    兔抗人、大鼠、小鼠BAX                
QYP1538    兔抗人、大鼠、小鼠BCL-2               
QYP1539    鼠抗人BCL-2               
QYP1540    兔抗人、大鼠、小鼠C-erbB-2                
QYP1541    鼠抗人CA15-3    2ml；5ml             
QYP1542    鼠抗人CA19-9   2ml；55ml             
QYP1543    鼠抗人CA125   2ml；5ml             
QYP1544    兔抗人、大鼠、小鼠CD3   2ml；5ml             
QYP1545    兔抗人、大鼠、小鼠CD10   2ml；5ml             
QYP1546    鼠抗人CD15    2ml；5ml             
QYP1547    鼠抗人CD20    2ml；5ml             
QYP1548    兔抗人、大鼠、小鼠CD22    2ml；5ml             
QYP1549    鼠抗人CD43    2ml；5ml             
QYP1550    鼠抗人CD45（LCA)   2ml；5ml             
QYP1551    鼠抗人CD45RO    2ml；5ml             
QYP1552    兔抗人、大鼠、小鼠CD54   2ml；5ml             
QYP1553    鼠抗人CD57    2ml；5ml             
QYP1554    鼠抗人CEA   2ml；5ml             
QYP1555    鼠抗人Chromogranin A    2ml；5ml             
QYP1556    鼠抗人、大鼠、小鼠CollagenⅣ    2ml；5ml             
QYP1557    鼠抗人、大鼠、小鼠Pan Cytokeratin   2ml；5ml             
QYP1558    鼠抗人、大鼠、小鼠Cytokeratin 4    2ml；5ml             
QYP1559    鼠抗人、大鼠、小鼠Cytokeratin 18   2ml；5ml             
QYP1560    鼠抗人、大鼠、小鼠Cytokeratin 19               
QYP1561    鼠抗人、大鼠、小鼠Desmin               
QYP1562    兔抗人、大鼠、小鼠E-Cadherin               
QYP1563    兔抗人、大鼠、小鼠EGFR               
QYP1564    鼠抗人EMA                
QYP1565    鼠抗人ESA               
QYP1566    鼠抗人Estrogen Receptor               
QYP1567    兔抗人八因子相關抗原                
QYP1568    兔抗人FAS               
QYP1569    兔抗人、大鼠、小鼠FAS-L               
QYP1570    兔抗人、大鼠、小鼠FGF2                
QYP1571    兔抗人、大鼠、小鼠Fibronectin               
QYP1572    抗人Gastric Mucin               
QYP1573    鼠抗人、大鼠、小鼠GFAP