人檸檬酸水解酶(ACL)試劑盒
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規    格：96T/48T
檢測標本：血清，血漿，尿液，胸腹水，腦脊液，細胞培養上清，組織勻漿等
檢測方法：ELISA
檢測類型：酶聯免疫夾心法
產品的用途：僅供科研課題使用

人檸檬酸水解酶(ACL)試劑盒FOR RESEARCH USE ONLY

Drug Names

Generic Name：人檸檬酸水解酶(ACL)試劑盒

      This kit can be used for determination of serum, plasma and liquid samples Organization Content.

The experimental principle:

The product levels were measured in samples of the kit by double antibody sandwichmethod. The product with the purified antibody coated microtiter plate, made of solid phase antibody, to package is the product antigen monoclonal antibodies are then added to the micropores, the product and then with HRP labeled antibody binding, the formation of antibody - antigen - antibody complex enzyme label, after thorough washing with TMB chromogenic substrate. TMB in the HRP enzyme catalytic conversion into the blue, and in the action of acid into the final yellow. This product is positively related to the depth of color and in the samples. Instrument measured absorbance in the 450nm wavelength with ELISA (OD), the product concentration in the samples was calculated by standard curve.

Materials provided with the kit

Specimen requirements

• serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
• cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant.
• extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
• Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.

人檸檬酸水解酶(ACL)試劑盒Assay procedure

1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separay. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 240ng/L,160ng/L ,80ng/L,40ng/L, 20ng/L)

2.add sample：Set blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.

3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.

4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.

人檸檬酸水解酶(ACL)試劑盒5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.

6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except  blank well. 

7.incubate：Operation with 3.

8.washing：Operation with 5.

9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃

10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).

11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.

人檸檬酸水解酶(ACL)試劑盒Important notes

• The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
• washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
• add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
• if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
• Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
• The substrate evade the light preservation.
• Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.
• All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.
• Do not mix reagents with those from other lots.

Calculate：

Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.

人檸檬酸水解酶(ACL)試劑盒Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

人檸檬酸水解酶(ACL)試劑盒其它產品

DL-半胱氨酸鹽酸鹽無水物    DL-2-氨基-3-巰基丙酸鹽酸鹽；DL-鹽酸半胱氨酸無水物；DL-氫氯半胱氨酸無水物；DL-Cysteine HC1    BR，99%    25克    10318-18-0    RT，避光
            100克        
            500克        
L-半胱氨酸鹽酸鹽無水物    L-2-氨基-3-巰基丙酸鹽酸鹽；L-Cysteine Hydrochloride Anhydrous    BR，99%    25克    52-89-1    RT，避光
            100克        
            500克        
L-胱氨酸    雙硫代氨基丙酸；L-膀胱氨基酸；(R,R)-3,3′-二硫雙(2-氨基丙酸)；L-β,β′-雙硫代；3,3’-二硫代二；L-3,3’-二硫代雙(2-氨基丙酸)；L-胱胺酸；雙-β-硫化；雙半胱氨酸；雙巰；L-Cystine    BR，99%    25克    56-89-3    RT，避光
            100克        
            500克        
DL-胱氨酸    DL-3,3′-二硫代雙(2-氨基丙酸)；DL-雙硫代；DL-胱胺酸；DL-膀胱氨基酸；(±)-3,3'-二硫代二(2-氨基丙酸)；DL-Cystine    BR，99%    5克    923-32-0    RT，避光
            25克        
            100克        
            500克        
L-胱氨酸鹽酸鹽    （R，R）3,3′-二硫雙（2-氨基丙酸鹽酸鹽）；雙-β-硫代鹽酸鹽；L-氫氯胱氨酸；L-Cystine HCL    BR，98%    25克    34760-60-6    RT，避光
            100克        
            500克        
L-谷氨酸    L-α-氨基戊二酸；L-2-氨基戊二酸；L-麩氨酸；L-Glutamic acid    BR，99%    100克    56-86-0    RT
            1公斤        
D-谷氨酸    D-麩氨酸；D-麩質酸；D-2-氨基戊二酸；D-α-氨基戊二酸；D-Glutamic acid    BR，99%    10克    6893-26-1    RT
            25克        
            100克        
            500克        
DL-谷氨酸    2-氨基戊二酸；DL-麩氨基；DL-Glutamic acid    BR，99%    25克    19285-83-7    RT
            100克        
            500克        
DL-谷氨酸水合物    2-氨基戊二酸一水物；DL-麩氨基一水物；DL-Glutamic acid monohydQYRBte    BR，99%    25克    617-65-2    RT
            100克        
            500克        
L-谷氨酸鹽酸鹽    L-氫氯谷氨酸；L-Glutamic acid HCL    BR，99%    100克    138-15-8    RT
            500克        
            1公斤        
L-谷氨酸單鈉鹽一水物    L-谷氨酸鈉；谷氨酸鈉；味精；L-氨基戊二酸鈉；L-2-氨基戊二酸單鈉鹽；麩氨酸鈉；谷氨酸一鈉；MSG    BR，99%    100克    CAS:6106-04-3    RT
            1公斤        
L-谷氨酸單鈉鹽無水物    L-谷氨酸鈉；谷氨酸鈉；味精；L-氨基戊二酸鈉；L-2-氨基戊二酸單鈉鹽；麩氨酸鈉；谷氨酸一鈉；MSG    BR，99%    100克    142-47-2    RT
            1公斤        
L-谷氨酰胺    L-(+)-2-氨基-5-酰胺酸；L-麩氨酰胺；L-谷氨酸酰胺；L-氨羰基丁氨酸；L-2-氨基戊二酸酰胺；L-谷氨酸-5-酰胺；L-谷酰胺；L-氨酰胺；左谷酰胺；L-Glutamine    BR，99%    25克    56-85-9    RT
            100克        
            500克        
DL-谷氨酰胺    DL-氨羰基丁氨酸；DL-氨酰胺；DL-谷氨酸酰胺；DL-Glutamine    BR，99%    5克    CAS:6899-04-3    RT，避光
            25克        
            100克        
L-異    L-； L-異閃白氨基酸；L-α-氨基-β-甲基戊酸；L-Isoleucine    BR，99%    5克    73-32-5    RT
            25克        
            100克        
            500克        
DL-異    DL-； DL-2-氨基-3-甲基戊酸；DL-α-氨基-β-甲基戊酸；DL-異閃白氨基酸；DL-Isoleucine    BR，98%    5克    443-79-8    RT
            25克        
            100克        
L-    L-白氨酸；L-閃白氨基酸；氨基異己酸；α-氨基-γ-甲基戊酸；α-氨基異己酸；L-2-氨基-4-甲基戊酸；L-α-氨基異丁基醋酸；L-Leucine    BR，99%    5克    61-90-5    RT
            25克        
            100克        
            500克        
D-    D-白氨酸；D-2-氨基-4-甲基戊酸；(R)-2-氨基-4-甲基戊酸；D-Leucine    BR，99%    5克    328-38-1    RT
            25克        
            100克        
            500克        
DL-    /DL-白氨酸；DL-2-氨基-4-甲基戊酸；DL-Leucine    BR，99%    25克    328-39-2    RT
            100克        
            500克        
BOC-L-    BOC-L-白氨酸；N-叔丁氧基羰基-L-；BOC-L-Leucine    BR，99%    10克    13139-15-6    RT
            25克        
            100克        
            500克        
N-乙酰-DL-    N-乙酰-DL-白氨酸；α-乙酰氨基異己酸；α-乙酰胺基異己酸；N-乙?；?DL-；N-Acetyl-DL-Leucine    BR，99%    5克    99-15-0    RT
            25克        
            100克        
            500克        
L-賴氨酸    L-2,6-二氨基己酸；L-己氨酸；L-松氨酸；L-Lysine    BR，99%    25克    56-87-1    RT，避光
            100克        
            500克        
L-賴氨酸鹽酸鹽    (S)-2,6-二氨基己酸鹽酸鹽；L-氫氯賴氨酸；L-Lysine HCL    BR，99%    25克    657-27-2    RT，避光
            100克        
            500克        
            1公斤        
DL-賴氨酸鹽酸鹽    DL-氫氯賴氨酸；DL-Lysine monohydrochloride    BR，99%    25克    70-53-1    RT，避光
            100克        
            500克