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人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株7WD10

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更新時(shí)間:2015-11-16 14:34:16瀏覽次數(shù):242次

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人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞株7WD10一、細(xì)胞操作參考書
二、生長(zhǎng)特性:貼壁    懸浮
三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件:
培養(yǎng)基                  90%              (GIBCO)
血清              10%  FBS(GIBCO)
溫度                       37℃
空氣條件      5% CO2,,95% AIR
生長(zhǎng)代數(shù)    P4
凍存條件    培養(yǎng)基70%、血清20%、DMSO10%
四、組成:
組份    規(guī)格
細(xì)胞一瓶    T25
細(xì)胞培養(yǎng)與操作說明    1份
五、細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
1.如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞,,而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài),請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心,加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天;同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡,請(qǐng)及時(shí)實(shí)驗(yàn)室,技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決
2.貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢:適當(dāng)提高血清濃度(zui高不能超過20%),或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度,考慮胰酶消化后,轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3.生長(zhǎng)不均:貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均,成島狀生長(zhǎng),可將細(xì)胞進(jìn)行消化,重懸打散細(xì)胞,加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

六、細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵照無菌操作)
1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2~3 ml  0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞(注意把握消化時(shí)間,通常控制在1-2min)
2.鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動(dòng)時(shí)(不建議消化到細(xì)胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml *培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落,吹散
3.取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液(每周2-3次),待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
特別注意:(如使用公共實(shí)驗(yàn)室或初次接觸細(xì)胞培養(yǎng),建議添加雙抗培養(yǎng))
1.收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間zui長(zhǎng)不宜超過72小時(shí))
2.貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化,請(qǐng)將細(xì)胞放置培養(yǎng)箱孵育過夜到第二天再做消化傳代
如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂,漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并實(shí)驗(yàn)室
Collagen I Cell Adhesion Assay
Fibronectin Cell Adhesion Assay
Collagen I-3D Gelling Kit
Collage I-Cell Culture Surface Coating Kit

MTT Cell Viability and Proliferation Assay
WST-1 Cell Viability and Proliferation Assay
Cell Senescence Assay
LDH Cytotoxicity Assay
Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay
Live/Dead Cell Staining Kit
Caspase-3 Assay

Mycoplasma PCR Detection Kit

Beta-Galactosidase Colorimetric Assay
LDH Cytotoxicity Assay
pNPP Phosphatase Assay
Colorimetric GAPDH Assay
Superoxide Disutase Assay
Catalase Activity Assay
Glutathione Peroxidase Assay
Cytochrome C Oxidase Assay
Citrate Synthase Assay
Glutamate Dehydrogenase Assay
Hexokinase Assay
Glucose-6-phosphate Dehydrogenase Assay
 Xanthine Oxidase Assay 
 Alanine Transaminase Assay 
 Glycerol-3-phosphate Dehydrogenase Assay   
 Glutathione S-transferases Assay   
 Alcohol Dehydrogenase Assay   
 體外管腔形成分析試劑盒

 I型膠原細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒  
纖維粘連細(xì)胞粘附檢測(cè)試劑盒 
 膠原I-3D凝膠試劑盒
 膠原I-細(xì)胞培養(yǎng)表面包被試劑盒

MTT細(xì)胞活力和增殖檢測(cè)試劑盒 
WST-1細(xì)胞活力和增殖檢測(cè)試劑盒 
細(xì)胞衰老檢測(cè)試劑盒
LDH細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒 
TUNEL色標(biāo)法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 
活/死細(xì)胞檢測(cè)試劑盒
 細(xì)胞凋亡蛋白酶-3分析試劑盒

 支原體PCR檢測(cè)試劑盒

 β-半乳糖苷酶比色檢測(cè)試劑盒  
LDH細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒 
硝基苯酸鈉(pNPP)磷酸酶檢測(cè)試劑盒 
比色法GAPDH分析試劑盒
 超氧化物歧化酶分析試劑盒
 過氧化氫酶活性分析試劑盒
谷胱甘肽過氧化物酶分析試劑盒
細(xì)胞色素C氧化酶含量試劑盒
檸檬酸合成酶的檢測(cè)試劑盒
谷氨酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒
己糖激酶檢測(cè)試劑盒
萄糖-6-磷酸 磷酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒
黃嘌呤氧化酶分析試劑盒
"轉(zhuǎn)氨酶分析試劑盒
"
甘油醛3磷酸脫氫酶分析試劑盒
"谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶分析試劑盒
"
"乙醇脫氫酶分析試劑盒
"
" 醛脫氫酶分析試劑盒
"
孔雀綠磷酸鹽檢測(cè)試劑盒 
比色法鈣分析試劑盒 
鐵元素檢測(cè)試劑盒

L  - 乳酸含量分析試劑盒
谷氨酸檢測(cè)試劑盒
"NAD/NADH 含量檢測(cè)試劑盒
"
丙酮酸檢測(cè)試劑盒
6-磷酸葡萄糖檢測(cè)試劑盒
葡萄糖檢測(cè)試劑盒
尿素檢測(cè)試劑盒
甘油檢測(cè)試劑盒
"甘油三酸酯檢測(cè)試劑盒
"
"總谷胱甘肽檢測(cè)試劑盒
"
氨檢測(cè)試劑盒
谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比率檢測(cè)試劑盒
膽堿檢測(cè)試劑盒

線粒體分離試劑盒
細(xì)胞色素C氧化酶含量試劑盒
檸檬酸合成酶的檢測(cè)試劑盒

一氧化氮色標(biāo)法檢測(cè)試劑盒 
總抗氧化能力檢測(cè)試劑盒
 超氧化物歧化酶分析試劑盒
 過氧化氫酶活性分析試劑盒
谷胱甘肽過氧化物酶分析試劑盒
"NAD/NADH 含量檢測(cè)試劑盒
"
"黃嘌呤氧化酶檢測(cè)試劑盒
"
總谷胱甘肽含量檢測(cè)試劑盒

茜素紅S染色試劑盒
人胚層檢測(cè)試劑盒
油紅O染色試劑盒
人干細(xì)胞多能性檢測(cè)試劑盒
堿性磷酸酶活性測(cè)定試劑盒
堿性磷酸酶染色檢測(cè)(紅色)
人間質(zhì)干細(xì)胞成脂肪細(xì)胞檢測(cè)試劑盒
人間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨形成檢測(cè)試劑盒
番紅O染色試劑盒
阿利新藍(lán)染色試劑盒

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