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人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251

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品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2015-11-16 14:26:26瀏覽次數(shù):373次

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人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無異常情況 ,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見細(xì)胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后,請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素)、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
扁桃體上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
口腔角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子
結(jié)腸上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 支氣管上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 小氣道上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 骨骼肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2
動(dòng)物上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2
腎系膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 尿道上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 前列腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 成骨細(xì)胞生長(zhǎng)因子
軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)因子
滑膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 髓核細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 星形細(xì)胞生長(zhǎng)因子
人胚胎干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 50X 
無異種多功能干細(xì)胞生長(zhǎng)因子  50X 
心肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子
 角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
滋養(yǎng)層細(xì)胞生長(zhǎng)因子 
前脂肪細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子
前脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)因子 
脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)因子
卵巢上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子
間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化生長(zhǎng)因子
間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪分化生長(zhǎng)因子
間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子
間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子
間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子-無動(dòng)物組分
間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化生長(zhǎng)因子
乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子  


胎牛血清
胎牛血清
胰酶/EDTA消化液
胰酶中和液
胰酶中和液-無血清
非酶細(xì)胞裂解液
細(xì)胞凍存液
無血清細(xì)胞凍存液  
人胚胎干細(xì)胞凍存液
人胚胎干細(xì)胞凍存液
臺(tái)盼藍(lán)
磷酸鹽緩沖液 
平衡鹽溶液 
多聚賴氨酸 
多聚賴氨酸 
0.2%的明膠溶液
胎牛血清 
青霉素/鏈霉素溶液 
青霉素/鏈霉素溶液 
抗真菌溶液 
抗菌/抗霉菌溶液
細(xì)胞培養(yǎng)超純水 
肌細(xì)胞分離液
牛腦垂體提取物 
牛腦垂體提取物 
胰島素鐵硒傳遞蛋白
左旋谷氨酰胺溶液 
100X非必需氨基酸
人胚層檢測(cè)試劑盒
油紅O染色試劑盒
人胚胎干細(xì)胞分離液
牛血漿纖維粘連蛋白
人細(xì)胞纖連蛋白
牛血漿玻連蛋白
重組人血清白蛋白

牛血漿纖維粘連蛋白

 膠原I-細(xì)胞培養(yǎng)表面包被試劑盒
多聚賴氨酸 
多聚賴氨酸 

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