1、滅菌過程的某些環節
原方法存在問題：一是捆扎的試管管口豎放, 滅菌結束又冷卻10min, 高壓鍋蓋上的冷凝水, 容易打濕棉塞, 為雜菌污染創造條件。二是排除冷空氣的操作不安全，鍋內有壓力時排除冷空氣, 由于內外的壓力差, 容易沖掉棉塞, 而且需要2次操作, 更增加了不安全的因素。
改進方法：1）在豎放的試管上放少量棉花, 使之弓起成饅頭形, 上用聚丙烯薄膜蓋好, 四周的薄膜要置于試管與內鍋內壁之間。2）加溫后, 就把放氣閥打開, 當有水蒸汽冒出, 持續2~3分時, 關閉放氣閥。上述做法優點：一是高壓鍋蓋上的冷凝水可沿凸起的薄膜流人內鍋底, 薄膜少量的冷凝水可被放置的棉花吸收, 這樣可保持棉塞的干燥。二是只需1次操作, 就能*排除冷空氣, 且安全可靠。
2、擱置斜面
原方法存在問題：從高壓鍋內剛取出的試管, 棉塞未干就擺斜面, 容易沾雜菌抱子而染雜；而且溫度在迅速下降的過程中, 會使試管壁上形成冷凝水, 對菌絲生長不利。
改進辦法：1）滅菌結束后, 鍋內余水, 用虹吸管抽出。2）操作者戴濕手套將整捆試管疊放于鍋內的木條上, 所擺斜面的長度同教材。3）蓋上鍋蓋, 稍留縫隙, 放在火上加熱片刻以烘干棉塞。4）培養基緩慢冷卻后, 直接放人接種箱內。
3、培養基的分裝
原方法存在問題：分裝時間長時, 瓊脂易凝固, 還需要再加熱、再分裝, 工序麻煩，每管分裝的數量靠眼去把握, 容易出誤差操作須特別小心, 稍不留意培養基就會沾在管口或管壁上。
改進方法：將配好的培養基倒入方形盤內, 待其自然冷卻后, 用小刀切成相等的方塊再分別裝人試管內。這樣培養基不沾污管口和管壁、分裝量可自由調整, 且不受溫度限制, 能保證分裝均勻, 單人、多人均可操作。
4、加棉塞
原方法存在問題：沒有闡述棉塞的制作方法, 學生不知道如何制作, 也沒有闡述合格棉塞的標準, 學生制作時, 把握不住棉塞的松緊度。
改進方法：棉塞的制作, 取適量的棉花根據試管的大小確定, 做成均勻的方片、將相鄰的邊分別折疊一下, 再卷成1個棉柱, 將有毛茬的一端折轉平貼在棉柱上, 并把此端塞入試管口2/3, 管外部分不少于1cm。檢查棉塞的松緊度：將棉塞提起, 試管跟著被提起而不下滑, 表明棉塞不松；將棉塞拔出, 可聽到輕微的聲音, 表明棉塞不緊。
