人活化*Ⅻ(FⅫa)ELISA試劑盒

英文名：Human activated coagulation factor Ⅻ (F Ⅻ a) ELISA kit

 ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。 

 原理

ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

注意事項：

1．在收集標本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。

2．我們提倡新鮮標本盡早檢測，對收集后及時進行檢測。1-3天左右檢測的樣本可儲存在4℃備用。如有特殊原因需要周期性收集標本，請將標本及時分裝后放在-20℃或- 70℃條件下保存，避免反復凍融。

液體類標本：

包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。

1．血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

2．血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

3．尿液：

用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4．細胞培養上清：

A、檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。

B、檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并 放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5）組織標本：

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

植物葉片的處理方法：

新鮮葉片加PBS研磨，離心，取上清，PBS濃度為0.01mol，PH值是7.4，轉速2500-3500轉，10分鐘左右
葉片采好放在2-8度就可以了，可以放置一周。處理好了再放到-20保存。取一克樣本，用5mlPBS勻漿取上清，PBS為0.01M，pH為7.4的

基本操作就是取糞便500ug-1g加入2-5ml的PBS，充分勻漿（百分之20）
PBS的PH值是：7.4  PBS濃度是0.01mol

糞便

基本操作就是取糞便500ug-1g加入2-5ml的PBS，充分勻漿（百分之20）
PBS的PH值是：7.4  PBS濃度是0.01mol
take Feces 500ug-1g，add PBS 2-5ml(PH7.4  0.01mol),Homogenized by hand or Grinders(20%)

-80度保存保存半年沒有問題。

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